Ključna razlika između HPLC i brze HPLC je u tome što je pritisak pumpe koji koristimo za HPLC oko 40 MPa, dok je pritisak pumpe za brzi HPLC oko 3-5 MPa.
Najčešća tehnika koju koristimo za odvajanje komponenti mješavine je “tečna hromatografija”. Postoji nekoliko tehnika za postizanje ove svrhe od kojih je HPLC veoma popularan. HPLC je skraćenica za tečnu hromatografiju visokih performansi koja identifikuje, kvantificira i odvaja komponente tečne mešavine na brz i efikasan način. Brzi HPLC je posebna primjena HPLC-a koja je u posljednje vrijeme privukla pažnju onih koji se bave proučavanjem rješenja.
Šta je HPLC?
HPLC je tečna hromatografija visokih performansi. Koristi visoki pritisak za potiskivanje rastvarača tako da oni prolaze kroz kolonu. Također, to je idealan način za odvajanje i proučavanje različitih spojeva kao što su aminokiseline, nukleinske kiseline, ugljikohidrati, steroidi, antibiotici i ugljovodonici. HPLC ima mnoge prednosti u odnosu na druge metode razdvajanja smeša, kao što su veća rezolucija i brža analiza. On uklanja potrebu za prepakiranjem i regeneracijom i nudi bolju kontrolu nad parametrima i na taj način povećava efikasnost odvajanja. U idealnom slučaju, HPLC je pogodan za primjene velikih razmjera jer može odvojiti vrlo male čestice i omogućava korištenje visokih pritisaka koji olakšavaju laki protok rastvarača.
Slika 01: HPLC kolona
Ukratko, metoda rada HPLC tehnike je kako slijedi. Prvo, treba da uvedemo uzorak u tok mobilne faze u diskretnim malim količinama pomoću pumpe. Pritisak pumpe treba održavati na 40 MPa. Ova struja mobilne faze perkolira kroz kolonu HPLC. Zatim, komponente u uzorku također prolaze kroz kolonu. Međutim, njihove brzine kretanja se razlikuju jedna od druge zbog razlike u interakcijama između komponenti uzorka i adsorbenta unutar kolone. Ovaj adsorbent nazivamo stacionarnom fazom jer se nalazi unutar kolone (ne kreće se). Zatim, na kraju kolone, možemo sakupiti uzorak koji eluira iz kolone, tako da možemo sakupiti komponente u uzorku odvojeno.
Šta je brzi HPLC?
Nedavno su naučnici istraživači u istraživačkom institutu Schering Plow razvili brzu HPLC tehniku koja je napredna verzija HPLC-a jer omogućava još brže odvajanje jedinjenja iz smeše. Takođe, poznata kao brza HPLC, ova tehnika koristi 2.7um fuzionisane čestice silicijum dioksida koje se prave spajanjem poroznog silicijum dioksida od 0.5um preko čvrste čestice silicijum dioksida. Ove jedinstveno napravljene čestice čine proceduru odvajanja veoma brzom i to pri niskom protivpritisku od onoga što koristimo u HPLC-u.
Slika 02: FPLC aparat
Brzi HPLC daje rezultate uporedive sa UPLC-om, ali naučnici smatraju da je ova tehnika superiorna jer ne zahteva veoma skupu opremu za ultravisoki pritisak. Ono što je sjajno je to što brzi HPLC ne zahtijeva nikakve nove laboratorijske protokole.
Koja je razlika između HPLC-a i brzog HPLC-a?
HPLC je tečna hromatografija visokih performansi, a brza HPLC je napredni oblik tečne hromatografije visokih performansi. Ključna razlika između HPLC i brze HPLC je u tome što je pritisak pumpe koji koristimo za HPLC oko 40 MPa. Dok je pritisak pumpe za brzi HPLC oko 3-5 MPa. Nadalje, pomoću HPLC tehnike možemo odvojiti različite spojeve kao što su aminokiseline, nukleinske kiseline, ugljikohidrati, steroidi, antibiotici i ugljovodonici, dok se brza HPLC tehnika uglavnom koristi za odvajanje proteina.
Infografika ispod predstavlja više informacija o razlici između HPLC-a i brzog HPLC-a.
Sažetak – HPLC vs Fast HPLC
HPLC je tehnika tečne hromatografije koja je postala veoma popularna u celom svetu. Brzi HPLC je nova verzija HPLC-a, istraživači sa Schering Plow Instituta razvili su ovu novu tehniku. Ključna razlika između HPLC-a i brzog HPLC-a leži u pritisku pumpe koji koristimo za separaciju. To je; pritisak pumpe koji koristimo za HPLC je oko 40 MPa. Ali, pritisak pumpe za brzi HPLC je oko 3-5 MPa.
