Ključna razlika FPLC i HPLC je u tome što je FPLC vrsta tečne hromatografije koja pročišćava velike biomolekule kao što su proteini, nukleotidi i peptidi, dok je HPLC vrsta tečne hromatografije koja odvaja jedinjenja male molekulske težine.
Tečna hromatografija je tehnika koja se koristi za razdvajanje uzorka na njegove pojedinačne komponente. Ovo razdvajanje nastaje zbog interakcije specifičnih uzoraka sa mobilnim i stacionarnim fazama. Komponente unutar uzorka se odvajaju na osnovu afiniteta svake komponente za mobilnu fazu u tečnoj hromatografiji. Kako mobilna faza i uzorak prolaze kroz kolonu, komponente uzorka počinju da se razdvajaju u trake koje se mogu detektovati UV-VIS spektroskopijom. Prema tome, FPLC i HPLC su dvije vrste tehnika tečne hromatografije.
Šta je FPLC?
FPLC je vrsta tečne hromatografije koja pročišćava velike biomolekule kao što su proteini, nukleotidi i peptidi. Brza proteinska tečna hromatografija (FPLC) je prvi put razvijena i plasirana na tržište u Švedskoj od strane kompanije Pharmacia 1982. Često se koristi za analizu ili prečišćavanje proteinskih mešavina. To se odvija na osnovu principa afiniteta komponenti uzorka prema pokretnoj tekućini (mobilna faza) i poroznom čvrstom materijalu (stacionarna faza). U FPLC-u, mobilna faza je pufer, a stacionarna faza je smola sastavljena od kuglica. Obično se sastoji od umrežene agaroze upakovane u cilindričnu staklenu ili plastičnu kolonu.
Slika 01: FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) aparat
U većini FLPC strategije koristi se smola za izmjenu jona. Stoga će se protein od interesa vezati za smolu interakcijom naboja. FLPC tehnika takođe koristi dva pufera: pufer 1 (pufer za rad) i pufer 2 (pufer za eluiranje). U početku, kada pufer i mješavina uzorka prolaze kroz kolonu, protein od interesa u mješavini će se vezati za smolu interakcijom naboja. Ali protein od interesa postaje disociran i vraća se u otopinu u puferu za eluiranje kada pufer za eluiranje prođe kroz kolonu na kraju procesa. Kasnije, otopina (eluant koji sadrži protein od interesa) prolazi kroz dva detektora, koji mjere koncentraciju soli i koncentraciju proteina. Kako se svaki protein eluira, pojavljuje se kao "vrh" tokom detekcije i može se prikupiti za dalju upotrebu.
Šta je HPLC?
HPLC je vrsta tečne hromatografije koja odvaja jedinjenja male molekularne težine. Godine 1969. prvi HPLC komercijalno je proizvela Waters Corporation, SAD. U tečnoj hromatografiji visokih performansi (HPLC), mješavina uzoraka (analit) u rastvaraču (mobilna faza) se pumpa kroz kolonu sa hromatografskim materijalom za pakovanje (stacionarna faza) pod visokim pritiskom. Smjesa uzorka se prenosi pokretnom strujom plina nosača helijuma ili dušika.
Slika 02: HPLC (tečna hromatografija visokih performansi)
Komponente u mješavini uzorka koje imaju najmanju količinu interakcije sa stacionarnom fazom ili najveću interakciju s mobilnom fazom brže će izaći iz kolone. S druge strane, komponente u mješavini uzorka koje imaju najveću interakciju sa stacionarnom fazom ili najmanju interakciju s mobilnom fazom će izaći iz kolone sporije. Na osnovu gore navedenog principa interakcije, komponente mješavine uzorka mogu se razdvojiti. Štaviše, detektor instrumenta identifikuje svaku komponentu mešavine uzorka koja izlazi iz kolone. HPLC se koristi za inspekciju ekoloških i bioloških uzoraka na prisustvo ili odsustvo poznatih jedinjenja, kao što su lekovi, toksini ili pesticidi. Koristi se u različitim industrijama kao što su farmaceutska, ekološka, forenzička i hemikalija.
Koje su sličnosti između FPLC i HPLC?
- FPLC i HPLC su vrste tečne hromatografije.
- Oba se koriste za odvajanje i identifikaciju bioloških uzoraka.
- Imaju tečnu mobilnu fazu i čvrstu stacionarnu fazu.
- Obje tehnike koriste kolonu za prolazak kroz uzorak.
- Ove tehnike koriste pumpe, detektore, ventile i softver za odvajanje i detekciju uzoraka.
Koja je razlika između FPLC-a i HPLC-a?
FPLC je vrsta tečne hromatografije koja se koristi za pročišćavanje velikih biomolekula kao što su proteini, nukleotidi i peptidi. HPLC je vrsta tečne hromatografije koja se koristi za odvajanje jedinjenja male molekularne težine. Dakle, ovo je ključna razlika između FPLC i HPLC. Štaviše, FPLC koristi monitore pH i provodljivosti, kao i kolektore frakcija. Nasuprot tome, HPLC ne koristi monitore pH i provodljivosti i sakupljače frakcija.
Infografika ispod navodi više razlika između FPLC i HPLC u obliku tabele.
Sažetak – FPLC vs HPLC
Hromatografija je laboratorijska analitička tehnika koja se koristi za odvajanje komponenti iz smjese. Podijeljen je na nekoliko tipova kao što su kolonska hromatografija, gasna hromatografija, tečna hromatografija, hromatografija sa jonoizmenjivačkom hromatografijom, itd. FPLC i HPLC su dve vrste tehnika tečne hromatografije. FPLC je vrsta tečne hromatografije koja se koristi za pročišćavanje velikih biomolekula kao što su proteini, nukleotidi i peptidi. S druge strane, HPLC je vrsta tečne hromatografije koja se koristi za odvajanje jedinjenja male molekularne težine. Dakle, ovo je sažetak razlike između FPLC i HPLC.
