Ključna razlika između RP HPLC i HIC je u tome što RP HPLC koristi polarniju mobilnu fazu i manje polarnu stacionarnu fazu. Dok HIC koristi hidrofobnu stacionarnu fazu koja omogućava hidrofobnim molekulima da se vežu za nju.
Hromatografija je analitička tehnika koja pomaže da se smjesa odvoji na njene komponente. Prvo, moramo otopiti uzorak koji treba odvojiti u otopinu. Ova mješavina otopine i tvari naziva se mobilna faza. Zatim se mobilna faza propušta kroz drugi materijal koji se naziva stacionarna faza. Stacionarna faza određuje razdvajanje komponenti. Do razdvajanja dolazi zbog podjele materijala između mobilne faze i stacionarne faze.
Šta je RP HPLC?
Izraz RP HPLC označava tečnu hromatografiju visokih performansi reverzne faze. Uključuje razdvajanje komponenti u mješavini, prema hidrofobnosti. Hidrofobne komponente u mobilnoj fazi povezuju se s imobiliziranim hidrofobnim ligandima na stacionarnoj fazi, dok hidrofilne komponente eluiraju kroz stacionarnu fazu bez vezivanja za površinu stacionarne faze.
Slika 01: HPLC aparat
Štaviše, ova metoda ima veću ponovljivost u poređenju sa drugim hromatografskim tehnikama, a takođe pokazuje široku primenljivost. Stoga ovu metodu koristimo u laboratorijama za preko 75% svih HPLC metoda. Većinu vremena koristimo vodenu mješavinu vode s mješljivim polarnim organskim rastvaračem kao mobilnom fazom. Tako će se osigurati pričvršćivanje hidrofobnih komponenti u otopini na površinu stacionarne faze.
Šta je HIC?
Izraz HIC označava hidrofobnu interakcionu hromatografiju. To je vrsta HPLC reverzne faze, a ova metoda se koristi uglavnom za odvajanje velikih biomolekula kao što su proteini. U ovoj metodi trebamo koristiti vodeni medij za izradu uzorka biomolekule. To je zato što organski rastvarači mogu uzrokovati denaturaciju proteina. Štaviše, ova tehnika koristi interakciju između velikih molekula sa blago hidrofobnom površinom stacionarne faze. Nadalje, moramo koristiti visoku koncentraciju soli u uzorku jer ona potiče zadržavanje proteina na pakovanju; ovaj proces se zove soljenje. Postepenim smanjenjem koncentracije soli, možemo učiniti da biomolekule eluiraju odvojeno prema njihovoj hidrofobnosti.
Uobičajeno, ova metoda koristi uslove suprotne onim kod hromatografije sa izmenom jona. U ovoj tehnici, prvo moramo proći pufersku otopinu kroz kolonu kako bismo smanjili otapanje otopljene tvari u uzorku. On čini da hidrofobne regije proteina budu izložene. Međutim, kada je molekula više hidrofobna, potrebno je manje soli za promicanje vezivanja. Ovdje se prvo eluiraju manje hidrofobne otopljene tvari, a prema promjeni koncentracije soli, više hidrofobnih otopljenih tvari se eluira posljednje.
Koja je razlika između RP HPLC i HIC?
Hromatografija je analitička tehnika za razdvajanje komponenti u mješavini. RP HPLC i HIC su dvije specijalizirane hromatografske tehnike. Ključna razlika između RP HPLC i HIC je u tome što RP HPLC koristi više polarnu mobilnu fazu i manje polarnu stacionarnu fazu, dok HIC koristi hidrofobnu stacionarnu fazu, koja omogućava hidrofobnim molekulima da se vežu za nju.
Infografika ispod sažima razliku između RP HPLC i HIC.
Sažetak – RP HPLC vs. HIC
Hromatografija je analitička tehnika za razdvajanje komponenti u mješavini. RP HPLC i HIC su dvije specijalizirane hromatografske tehnike. Ključna razlika između RP HPLC i HIC je u tome što RP HPLC koristi polarniju mobilnu fazu i manje polarnu stacionarnu fazu, dok HIC koristi hidrofobnu stacionarnu fazu, koja omogućava hidrofobnim molekulima da se vežu za nju.
