Ključna razlika između HPLC reverzne faze i normalne faze HPLC je u tome što HPLC reverzne faze koristi nepolarnu stacionarnu fazu i polarnu mobilnu fazu dok HPLC normalne faze koristi polarnu stacionarnu fazu i manje polarnu mobilnu fazu.
HPLC normalne faze je najstarija tehnika HPLC-a koju je Tswett koristio u svom odvajanju biljnih ekstrakata; koristio je kredu u staklenoj koloni. Ovo je bio klasičan način hromatografije koji je doveo do toga da je nazvana „normalnom“tehnikom. HPLC reverzne faze, s druge strane, suprotna je uobičajenoj tehnici, koju su naučnici razvili u posljednje vrijeme.
Šta je HPLC reverzne faze?
Reverzna faza HPLC je hromatografska tehnika u kojoj koristimo hidrofobnu stacionarnu fazu. Od svih HPLC metoda, ovu metodu koristimo za oko 70% zbog njene široke primjene i ponovljivosti. Stacionarna faza je nepolarna, a mobilna faza je polarna.
U većini slučajeva, naučnici koriste vodenu mešavinu vode sa mešljivim, polarnim organskim rastvaračem, kao što je acetonitril ili metanol kao mobilna faza. Stoga, analiti stupaju u interakciju sa nepolarnom stacionarnom fazom.
Šta je HPLC normalne faze?
HPLC normalne faze je hromatografska tehnika u kojoj koristimo hidrofilnu stacionarnu fazu. To je tradicionalna metoda HPLC, iako je ne koristimo toliko. Stacionarna faza je polarna, a mobilna faza je nepolarna. Što je još važnije, mobilna faza ove tehnike je 100% organska. To znači da se za ovo ne koristi voda.
Slika 01: Profil uzorka za HPLC hromatograme normalne faze i reverzne faze prema polaritetu komponenti u analitu.
Uobičajeno, stacionarna faza sadrži silicijum dioksid, cijano, diol, amino vezane faze, itd. Mobilne faze uključuju organske rastvarače kao što su heksan, etil acetat, itd. Ova tehnika se zasniva na zadržavanju molekula rastvarača ili analita na polarna stacionarna faza.
Koja je razlika između HPLC reverzne faze i normalne faze?
Reverzna faza HPLC je hromatografska tehnika u kojoj koristimo hidrofobnu stacionarnu fazu. Stacionarna faza ove tehnike je nepolarna dok je mobilna faza polarna. Štaviše, naučnici koriste vodenu mešavinu vode sa mešljivim, polarnim organskim rastvaračem, kao što je acetonitril ili metanol kao mobilnu fazu u HPLC reverznoj fazi. Nasuprot tome, HPLC normalne faze je hromatografska tehnika u kojoj koristimo hidrofilnu stacionarnu fazu. Stacionarna faza ove tehnike je polarna, dok je mobilna faza nepolarna. Uz to, naučnici koriste organske rastvarače kao što su heksan, etil acetat itd. kao mobilnu fazu HPLC normalne faze. Infografika ispod predstavlja razliku između HPLC reverzne faze i normalne faze u obliku tabele.
Sažetak – HPLC obrnute faze u odnosu na normalnu fazu
Tehnike HPLC reverzne faze i normalne faze su dvije tehnike tečne hromatografije. Ključna razlika između HPLC reverzne faze i normalne faze HPLC je u tome što HPLC reverzne faze koristi nepolarnu stacionarnu fazu i polarnu mobilnu fazu dok HPLC normalne faze koristi polarnu stacionarnu fazu i manje polarnu mobilnu fazu.
