Ključna razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena je u tome što je amplifikacija gena proces pravljenja mnogih kopija gena od interesa in vitro lančanom reakcijom polimeraze. Ali, kloniranje gena je proces pravljenja mnogih kopija gena od interesa in vivo stvaranjem rekombinantnog plazmida i transformacijom u bakteriju domaćina.
Gen je specifičan fragment DNK koji kodira protein. Organizam poseduje hiljade gena. Osim toga, moguće je umnožiti sekvence DNK važnih gena korištenjem molekularno bioloških tehnika. Amplifikacija gena i kloniranje gena su dvije takve procedure. Obje procedure proizvode mnoge kopije gena od interesa. Međutim, postoji razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena u smislu njihove metodologije.
Šta je amplifikacija gena?
Amplifikacija gena je proces pravljenja kopija određenog gena pomoću lančane reakcije polimeraze. Da bi se gen pojačao, DNK tog određenog organizma treba biti ekstrahirana korištenjem odgovarajućeg protokola ekstrakcije DNK. Zatim ekstrahovanu dvolančanu DNK treba denaturirati da bi se dobili odvojeni jednolančani lanci. Sljedeći korak uključuje korištenje PCR reakcije za pravljenje kopija gena od interesa. Nadalje, PCR mješavina sadrži potrebne prajmere, nukleotide, enzim DNK polimerazu, DNK šablona i druge sastojke. Na kraju PRC programa dolazi do amplifikacije gena od interesa.
Slika 01: Amplifikacija gena
Dalje, amplifikacija gena je početni korak u detekciji specifične sekvence, identifikaciji organizma, dijagnosticiranju bolesti i izradi genskih biblioteka, itd.
Šta je kloniranje gena?
Kloniranje gena je metoda u genetskom inženjeringu za pravljenje biblioteka gena ili mnogo kopija gena od interesa. Ovaj proces uključuje stvaranje rekombinantnog plazmida i transformaciju rekombinantnog plazmida u ćeliju domaćina, posebno u bakterijsku. Klon je identična kopija originalnog organizma ili molekule. Kloniranje gena može napraviti hiljade klonova gena.
Slika 02: Kloniranje gena
Kada je gen od interesa identifikovan, on se može odvojiti od genoma određenog organizma ograničavajući ga specifičnim restrikcijskim enzimima. Zatim, koristeći isti restrikcijski enzim, treba otvoriti plazmide (vektori) kako bi se ubacio genski fragment. Zatim se rekombinantni plazmid transformiše u bakteriju domaćina koristeći različite metode kao što je elektroporacija. Neki od rekombinantnih plazmida ulaze u bakterijske ćelije domaćina. Koristeći antibiotik, transformisane bakterije se mogu odabrati, izolovati i kultivisati u svježim podlogama. Dakle, ova tehnika pomaže da se dobiju milioni klonova gena.
Koje su sličnosti između amplifikacije gena i kloniranja gena?
- Amplifikacija gena i kloniranje gena su dvije molekularne biološke tehnike.
- U obje ove tehnike, određena DNK sekvenca ili gen se umnožava u milion ili hiljada puta.
- Štaviše, obje tehnike su od najveće važnosti za mnoga naučna područja.
Koja je razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena?
Amplifikacija gena je proces koji pravi kopije određenog gena korištenjem in vitro metode zvane PCR. S druge strane, kloniranje gena je proces kojim se prave kopije određenog gena primjenom in vivo metode kroz konstruiranje rekombinantnih vektora i njihovo umnožavanje u živom organizmu. Dakle, ovo je ključna razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena. Nadalje, amplifikacija gena traje samo nekoliko sati, dok je za kloniranje gena potrebno nekoliko dana. Stoga i ovo možemo smatrati razlikom između amplifikacije gena i kloniranja gena. Štaviše, proces amplifikacije gena pokazuje manje grešaka, dok proces kloniranja gena pokazuje više grešaka.
Sljedeća infografika sumira razliku između amplifikacije gena i kloniranja gena.
Sažetak – Amplifikacija gena protiv kloniranja gena
Amplifikacija gena je proces pravljenja kopija željenog gena korištenjem lančane reakcije polimeraze pod in vitro uvjetima dok je kloniranje gena proces pravljenja kopija gena od interesa korištenjem rekombinantnog molekula DNK i živog organizma/domaćina bakterija. Dakle, ovo je osnovna razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena.
