Ključna razlika – HPLC vs HPTLC
Ključna razlika između HPLC i HPTLC je u tome što HPLC dozvoljava kvantitativno odvajanje komponenti u uzorku dok HPTLC ne dozvoljava kvantitativno odvajanje komponenti u uzorku.
Hromatografija je metoda fizičkog razdvajanja koja se koristi za odvajanje i identifikaciju komponenti u mješavini. I HPLC i HPTLC su hromatografske tehnike. HPLC je tečna hromatografija visokih performansi. HPTLC je tankoslojna hromatografija visokih performansi.
Šta je HPLC?
HPLC je tečna hromatografija visokih performansi. To je analitička tehnika koja se koristi za odvajanje, identifikaciju i kvantifikaciju komponenti u mješavini. U ovoj tehnici, uzorak se rastvara u odgovarajućem rastvaraču. Zatim se rastvarač sa uzorkom propušta kroz pumpu sa datim pritiskom. Pumpa je napunjena čvrstim adsorbirajućim materijalom. Tada se neke komponente snažno vežu za upijajući materijal, dok se druge komponente labavo vezuju. To uzrokuje da komponente imaju različite brzine protoka kroz pumpu. Stoga se komponente mogu lako odvojiti.
Slika 01: HPLC sistem
Adsorbentni materijal koji ispunjava pumpu poznat je kao stacionarna faza. Rastvarač sa otopljenim uzorkom poznat je kao mobilna faza. Pumpa koja se koristi u ovoj tehnici naziva se kolona. Kolona je ispunjena adsorbujućim materijalom, najčešće česticama silicijum dioksida. Veličina ovih čestica može biti u rasponu od 2-50 μm. Na proces separacije utiče sastav mobilne faze i temperatura sistema. Interakcije između stacionarne faze i komponente u uzorku mogu biti hidrofobne interakcije, dipol-dipol interakcije, ionske veze, itd.
Radni pritisak HPLC-a je znatno veći od pritiska tradicionalne tečne hromatografije. Leži oko 50-350 bara. Razlika između tečne hromatografije i HPLC-a je u tome što u tečnoj hromatografiji uzorak pada kroz kolonu pod dejstvom gravitacije, dok se u HPLC-u uzorak nalazi pod pritiskom kroz kolonu. Veličina kolone i upijajućih čestica su takođe vrlo male u poređenju sa tradicionalnom tečnom hromatografijom. Međutim, rezolucija koju daje HPLC tehnika je superiorna.
Šta je HPTLC?
HPTLC je tankoslojna hromatografija visokih performansi. To je napredni i automatizirani oblik tradicionalnog TLC-a. Ova tehnika omogućava efikasno rešavanje u kratkom vremenskom periodu. U ovoj metodi analize, uzorak i referenca se mogu analizirati istovremeno, što omogućava da se uzorak uporedi sa referencom. Daje poboljšanu analitičku tačnost od ostalih hromatografskih tehnika. Vrijeme potrebno za analizu je manje. Tehnika je jeftina tehnika.
Slika 02: Analiza boja za hranu pomoću HPTLC
HPTLC metoda je jednostavan proces, a korak pripreme uzorka je također eliminisan (U tradicionalnoj TLC, korak pripreme uzorka je uključen prije odvajanja. Ovaj korak uključuje čišćenje i obogaćivanje). Otapalo se može koristiti direktno bez ikakvog prethodnog tretmana, iako druge hromatografske tehnike zahtijevaju prethodnu obradu kao što je otplinjavanje, filtracija, itd.
Adsorbentni materijal koji se koristi u HPTLC je silicijum sa vrlo malim veličinama čestica. U tradicionalnom TLC-u, veličina čestica silicijum dioksida je 5-20 μm, dok je u HPTLC-u 4-8 μm. Uzorak se nanosi na HPTLC ploču pomoću aplikatora. Daje jednoličnu i sigurnu primjenu. Zatim se ploče stavljaju u komoru koja ima mobilnu fazu. Komora treba biti zasićena parom mobilne faze. Nakon HPTLC procesa, mrlje koje su se pomjerile mogu se otkriti. Prilikom otkrivanja mrlja na ploči, HPTLC tehnika koristi odgovarajuću UV regiju ili jodnu komoru.
Koja je razlika između HPLC i HPTLC?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC je tečna hromatografija visokih performansi. | HPTLC je tankoslojna hromatografija visokih performansi. |
| Tehnika | |
| U HPLC-u, mobilna faza sa rastvaračem se propušta kroz kolonu ispunjenu stacionarnom fazom. | U HPTLC, uzorak se uočava na TLC ploču i stavlja unutar komore koja sadrži mobilnu fazu; tada se uzorku dozvoljava da migrira prema gore po ploči zajedno sa mobilnom fazom. |
| Merenje | |
| U HPLC-u, razlike između brzina protoka komponenti kroz kolonu se koriste za odvajanje komponenti u uzorku. | U HPTLC-u, razlike između udaljenosti koje je prešla svaka komponenta u uzorku koriste se za razdvajanje komponenti u uzorku. |
| Kvantitativno razdvajanje | |
| HPLC omogućava kvantitativno odvajanje komponenti u uzorku. | HPTLC ne dozvoljava kvantitativno odvajanje komponenti u uzorku. |
Sažetak – HPLC vs HPTLC
HPLC i HPTLC su dvije hromatografske tehnike. Ključna razlika između HPLC i HPTLC je u tome što HPLC dozvoljava kvantitativno odvajanje komponenti u uzorku dok HPTLC ne dozvoljava kvantitativno odvajanje komponenti u uzorku.
