Ključna razlika između Pour ploče i Spread ploče je u tome što se poznata zapremina uzorka rasprostire po površini agar podloge u ploči za širenje, dok se u ploči za izlivanje poznata zapremina uzorka pomeša sa agar, a zatim sipa u tanjir. Kada se uporedi tačnost ove dvije tehnike, ploča za izlivanje ima veću preciznost od ploče za posipanje.
Standardna metoda brojanja ploča je pristup baziran na rastu koji broji broj živih (rastućih/uzgojnih/živih) mikroorganizama unutar uzorka. To je moćna metoda koja se koristi u mnogim mikrobiološkim poljima za analizu broja živih mikroorganizama. Polja kao što su hrana i mliječni proizvodi, medicina, okoliš, vodena i poljoprivredna, mikrobna genetika, molekularna mikrobiologija, razvoj medija za rast i biotehnologija (bioreaktorska tehnologija, fermentacija, tretman otpadnih/otpadnih voda itd.) koriste ovu tehniku. Nadalje, postoje dva glavna načina za izvođenje standardnog brojanja ploča: to su tehnika širenja ploča i tehnika ploče za izlijevanje.
Šta je ploča za izlijevanje?
Tehnika zalivne ploče je mikrobna metoda za nabrajanje nekih živih ćelija prisutnih u uzorku. Posebnost metode pour ploče je da se poznata zapremina uzorka prvo pomiješa sa agarom, a zatim izlije u ploču.
Slika 01: Tanjir za izlivanje
Ostali koraci su slični tehnici raširenih ploča o kojoj se govori u sljedećem odjeljku. Sljedeći korak nakon izlijevanja agara pomiješanog s uzorkom je da se omogući da se stvrdne i inkubira. Nakon inkubacije, brojanje broja živih kolonija je od suštinskog značaja za izračunavanje konačne CFU za 1 g ili 1 ml.
Šta je Spread Plate?
Raširena ploča je tehnika za nabrajanje živih ćelija u uzorku. Za ovu tehniku, potrebno je serijsko razrjeđivanje uzorka kako bi se osiguralo da barem jedna daje prebrojiv broj kolonija. Proces ovdje je pipetiranje određenog volumena razrjeđenja na površinu agar ploče i brzo i ravnomjerno raspoređivanje po površini agara staklenim raspršivačem, koji je zapaljen alkoholom i ohlađen. Izvođenje ponavljanja je neophodno da bi se dobila pouzdana srednja vrijednost. Sljedeći korak je osušiti ove ploče na kratak period, a zatim ih preokrenuti i staviti u inkubator na odgovarajućoj temperaturi za rast i za određeni period inkubacije.
Slika 02: Raširena ploča
Nakon inkubacije, pregled ploča će pokazati rast. Pri jednom ili više razrjeđenja, broj ćelija prisutnih u inokulantima (npr. 100 ili 200 μl) će dovesti do između 30 i 300 odvojenih kolonija na površini agara. Manje od 30 kolonija je statistički nepouzdano. Brojeve iznad 300 je teško nabrojati i skloni su greškama.
Koje su sličnosti između ploče za izlivanje i ploče za širenje?
- Raširena ploča i ploča za izlivanje su dvije tehnike za dobivanje broja živih ćelija prisutnih u uzorku.
- Obje su direktne metode.
- Greške uzorkovanja se mogu dogoditi u obje metode.
- Ograničenja uslova rasta utiču na ishod obe metode.
- Tehničke greške također mogu ometati konačni rezultat obje metode.
- Iako su održive, dvije metode se ne koriste za uzgoj nekulturnih bakterija.
Koja je razlika između ploče za izlivanje i ploče za širenje?
Pour ploča je mikrobna tehnika za nabrajanje više živih ćelija u uzorku. Tehnika raširenih ploča je još jedna tehnika za nabrajanje bakterija koje rastu na površini medija. U tehnici ploče za izlivanje, proces je dodavanje uzorka na očvrsnu površinu medija na ploči za izlivanje. Ali, u tehnici raspršene ploče, proces je da se uzorak pomiješa sa rastopljenim agarom i zatim se to izlije u ploču.
S obzirom na tačnost ove dvije tehnike, ploča za izlivanje ima veću preciznost od ploče za posipanje. Štoviše, za razliku od ploče za izlivanje, stakleni posipač se koristi za ravnomjerno raspoređivanje uzorka po površini ploče za posipanje. Dalje, pomoću pour ploče moguće je nabrojati aerobne, anaerobne i fakultativne anaerobe. Međutim, pomoću ploče za posipanje moguće je samo nabrojati aerobe. Nadalje, ploče s očvrsnutim agarom su neophodne za izvođenje ploče za širenje, dok su tečne rastopljene agarne podloge neophodne za metodu sipanja.
Sažetak – Pour Plate vs Spread Plate
Pour ploča i Spread plate su dvije tehnike u mikrobiologiji koje olakšavaju prebrojavanje mikrobnih ćelija u uzorku. Obje metode su zasnovane na rastu, pa se mjere održive ćelije. Tokom ploče za sipanje, poznata zapremina uzorka se pomeša sa rastopljenim agarom i izlije u ploču. Tokom rasipanja ploče, poznata zapremina se širi na površinu očvrslog agar podloge. Ovo je razlika između tanjira za izlivanje i ploče za posipanje.
