Ključna razlika – In situ hibridizacija naspram imunohistokemije
Dijagnostika raka i zaraznih bolesti je popularan trend u kojem se koriste nove tehnike zasnovane na proteomici i genomici u svrhu identifikacije tumora ili infektivnih stanica, njihove proliferacije i mjesta razvoja stanica i analize genetske osnove većine prenosivih i nezarazne bolesti. To će rezultirati preciznom obradom i dizajniranjem lijekova i razvojem prilagođenih terapija za bolesti. In situ hibridizacija (ISH) i imunohistohemija (IHC) su dvije takve široko korištene tehnike u biologiji raka, a ključna razlika između in situ hibridizacije i imunohemije leži u molekulima koji se koriste u postupku analize. U ISH, sonde nukleinske kiseline se koriste u analizi, dok se u IHC-u, monoklonska i poliklonska antitijela koriste za dijagnostička određivanja.
Šta je in situ hibridizacija (ISH)?
In situ hibridizacija je tehnika hibridizacije nukleinske kiseline koja se direktno izvodi na dijelu ili dijelu tkiva, u cijelom tkivu ili u stanicama. Tehnika ovisi o teoriji Watson Crick komplementarnog uparivanja baza, što rezultira ili DNK-DNK hibridima ili DNK-RNA hibridima koji mogu otkriti mutirane gene ili identificirati traženi gen od interesa. Jednolančane DNK sekvence, dvolančane DNK sekvence, jednolančane RNK sekvence ili sintetičke oligonukleotidne sekvence se koriste kao sonde tokom tehnike hibridizacije, a ove sonde su označene radioaktivnim fosforom na svom 5' kraju za postupke identifikacije nakon autoradiografije ili označene fluorescentnim bojama. Dostupne su različite vrste ISH tehnika na osnovu tipa sonde koja se koristi i vrste tehnike vizualizacije koja se prati.
Slika 01: Fluorescentna in situ hibridizacija
Postoje mnoge primjene ISH, uglavnom u molekularnoj dijagnostici zaraznih bolesti kako bi se identificiralo prisustvo patogena i potvrdio patogen putem molekularne dijagnostike. Takođe se koristi u oblastima razvojne biologije, kariotipizacije i filogenetske analize i fizičkog mapiranja hromozoma.
Šta je imunohistohemija (IHC)?
U tehnici IHC, glavni analizirani molekul je antigen. Tokom IHC-a, monoklonska i poliklonska antitijela se koriste za određivanje prisustva antigena nakon infekcije ili statusa proliferacije malignih ćelija. Tehnika se zasniva na vezivanju antigen-antitelo, a za ovu tehniku se koriste oznake enzima; jedna od takvih aplikacija je ELISA (enzimski imunosorbentni test). Markeri takođe mogu biti fluorescentno označena antitela ili radio obeležena antitela.
Slika 02: Imunohistohemija
IHC se široko koristi za otkrivanje ćelija raka. Dijagnostičke procedure ciljaju na antigene prisutne na tumorskim stanicama kako bi se identificirali i karakterizirali tumor. Isti postupak je uključen i za dijagnosticiranje infektivnih agenasa. Monoklonska i poliklonska antitijela se također koriste za analizu različitih genskih proizvoda omogućavajući reakciju vezivanja antitijela i antigena između željenog proteina i primijenjenog sintetičkog antitijela.
Koje su sličnosti između in situ hibridizacije i imunohistokemije?
- ISH i IHC su vrlo specifične reakcije.
- Obje tehnike su vrlo precizne.
- Obje tehnike se mogu koristiti u dijagnostici raka i zaraznih bolesti.
- Ove tehnike se izvode u sterilnim in-vitro okruženjima.
- Obje su brze tehnike koje daju ponovljive rezultate.
- ISH i IHC koriste metode detekcije kao što su radio označavanje i tehnike fluorescencije.
Koja je razlika između in situ hibridizacije i imunohistokemije?
In situ hibridizacija vs imunohistokemija |
|
| ISH je tehnika hibridizacije nukleinske kiseline koja se direktno izvodi na dijelu ili dijelu tkiva ili na cijelom tkivu. | IHC je tehnika u kojoj se monoklonska i poliklonska antitela koriste za određivanje prisustva antigena, koji su specijalni proteinski markeri postavljeni na površinu ćelije. |
| Tip analiziranih biomolekula | |
| ISH analizira nukleinske kiseline. | IHC analizira proteine-antigene. |
| Osnove biohemijske reakcije | |
| U ovoj tehnici se javlja komplementarno uparivanje baza između DNK-DNK ili DNK-RNA. | Interakcije antigen-antitijelo uključene su u imunohistohemiju. |
| Metode detekcije vezane za enzime | |
| Metode detekcije povezane sa enzimima ne mogu se koristiti u ISH. | Metode detekcije povezane sa enzimima mogu se koristiti u IHC-u. |
Sažetak – In situ hibridizacija naspram imunohistokemije
Molekularna dijagnostika su brze i potvrđujuće metode koje se mogu koristiti za identifikaciju nezarazne bolesti kao što je rak ili zarazne bolesti kao što je HIV ili tuberkuloza na osnovu molekularnih markera prisutnih na stanicama koji dovode do manifestacije bolesti. Molekularni markeri mogu biti prisutni u obliku ekspresiranih proteina ili na genetskom nivou na osnovu kojih se uvode različite nove tehnike za povećanje efikasnosti i manje su naporne, iako su ove tehnike skupe. Tako ISH ovisi o formiranju DNK-DNK ili DNK-RNA hibrida, a IHC ovisi o specifičnim reakcijama između antitijela i antigena. Ovo je razlika između in situ hibridizacije.
Preuzmite PDF verziju in situ hibridizacije vs imunohistokemije
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za vanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje Razlika između in situ hibridizacije i imunohistokemije.
