Ključna razlika – imunofluorescencija naspram imunohistokemije
Dijagnostika bolesti, koja koristi molekularne biološke metode, postala je novo područje kliničke laboratorijske tehnologije. Uključuje sve testove i metode za identifikaciju bolesti i razumijevanje uzroka bolesti analizom DNK, RNK ili eksprimiranih proteina u organizmu. Brzi napredak u molekularnoj dijagnostici omogućio je osnovna istraživanja zaraznih i nezaraznih bolesti. Oni se koriste za određivanje promjena u sekvenci ili nivoima ekspresije u ključnim genima ili proteinima uključenim u bolest. Imunofluorescencija (IF) i imunohistohemija (IHC) su dvije takve široko korištene tehnike u biologiji raka. IF je vrsta IHC gdje se metoda fluorescentne detekcije koristi za analizu monoklonskih i poliklonskih antitijela, dok IHC koristi metode zasnovane na hemijskim sredstvima za otkrivanje monoklonskih i poliklonskih antitijela. Ovo je ključna razlika između IF i IHC.
Šta je imunofluorescencija (IF)?
Imunofluorescencija je tehnika detekcije u kojoj se antitela koja se koriste u testu obeležavaju fluorescentnim bojama ili fluorescentnim proteinima u svrhu detekcije. Obilježena sekundarna antitijela mogu dovesti do neželjenih pozadinskih signala; stoga, IF tehnika se zasniva na obeležavanju samog primarnog antitela u ovom trenutku kako bi se izbegli neželjeni signali tokom detekcije. Ovom tehnikom sprečava se nespecifično vezivanje između primarnog i sekundarnog antitijela, a ono je brže jer nema sekundarnog koraka inkubacije. Kvalitet podataka je također poboljšan.
Slika 01: Dvostruko imunofluorescentno bojenje za BrdU, NeuN i GFAP
Fluorohromi ili fluorescentne boje su jedinjenja koja mogu apsorbovati zračenje, po mogućnosti ultraljubičasto zračenje koje je pobuđeno. Kada čestice dođu u osnovno stanje iz pobuđenog stanja, one emituju zračenje koje detektor hvata i detektuje kako bi formirao spektar. Od velike je važnosti da fluorescentna oznaka bude kompatibilna i stabilna za određenu reakciju i treba je pravilno konjugirati s antitijelom kako bi se dobili precizni rezultati. Jedan od najčešće korišćenih fluorohroma je fluorescein izotiocijanat (FITC), koji je zelene boje, sa apsorpcionim i emisionim vršnim talasnim dužinama od 490 nm i 520 nm, respektivno. Rodamin, drugi agens koji se koristi u IF-u, je crvene boje i ima različite talasne dužine apsorpcije i emisije od 553 nm i 627 nm.
Šta je imunohistohemija (IHC)?
IHC je metoda molekularnog testiranja koja se praktikuje kako bi se identificiralo i potvrdilo prisustvo antigena u ciljnoj ćeliji. Ciljna ćelija može biti infektivna čestica, mikrobni patogen ili ćelija malignog tumora. IHC koristi monoklonska i poliklonska antitijela za određivanje prisutnosti antigena prisutnih na površini ćelije ciljnih stanica. Tehnika se zasniva na vezivanju antigen-antitijelo. Marker za detekciju je konjugiran s ovim antitijelima kako bi se otkrilo prisustvo ili odsustvo određenog antigena. Ovi markeri mogu biti hemijski markeri kao što su enzimi, fluorescentno označena antitela ili radio obeležena antitela.
Slika 02: kriška mišjeg mozga obojena imunohistohemijom
Najpopularnija primena IHC je u biologiji ćelija raka za identifikaciju prisustva malignih tumora, ali se takođe koristi za otkrivanje zaraznih bolesti.
Koje su sličnosti između imunofluorescencije i imunohistokemije?
- Imunofluorescencija i imunohistohemija se odvijaju u uslovima in vitro.
- Obje tehnike su bazirane na antigen-antitijelo
- Obje su vrlo brze tehnike.
- Rezultati tehnika su ponovljivi.
- Oba imaju poboljšan kvalitet podataka.
- Ove tehnike koje se koriste u dijagnostici raka i zaraznih bolesti.
Koja je razlika između imunofluorescencije i imunohistokemije?
Imunofluorescencija vs imunohistohemija |
|
| IF je tehnika detekcije u kojoj se antitela korišćena u testu obeležavaju fluorescentnim bojama ili fluorescentnim proteinima za detekciju. | IHC je tehnika detekcije u kojoj se antitela korišćena u testu obeležavaju hemikalijama ili radioaktivnim elementima za detekciju. |
| Preciznost | |
| Preciznost je veća u IF tehnici u poređenju sa IHC. | Preciznost je niža u IHC-u. |
| Specifičnost | |
| IF je konkretniji. | IHC je manje specifičan. |
Sažetak – Imunofluorescencija vs imunohistokemija
Molekularni mehanizmi doveli su do mnogih promjena u oblasti medicine, dovodeći do naprednih metoda molekularnog testiranja koje su donijele revolucije u području dijagnostike. Ovi izumi su doveli do brze i tačne identifikacije i potvrđivanja bolesti, čime su omogućili uspješnu primjenu i proizvodnju lijekova. Ove tehnike se također koriste u farmakologiji kako bi se pronašle mete lijekova i potvrdila farmakokinetička svojstva lijeka tokom metabolizma lijeka. IF i IHC su dvije dijagnostičke metode koje se zasnivaju na konceptu vezivanja antigena i antitijela, iako se način detekcije u obje tehnike razlikuje. IF koristi princip fluorescencije za detekciju antigena, a IHC koristi koncept hemijske konjugacije za detekciju antigena. Ovo je razlika između IF i IHC.
Preuzmite PDF verziju imunofluorescencije vs imunohistokemije
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za vanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje Razlika između imunofluorescencije i imunohistokemije.
