Ključna razlika između direktne i indirektne imunofluorescencije je u tome što direktna imunofluorescencija koristi jedno antitelo koje deluje protiv mete od interesa, dok indirektna imunofluorescencija koristi dva antitela da označi metu od interesa.
Imunofluorescencija ili snimanje ćelija je tehnika koja se koristi za obeležavanje specifičnog ciljnog antigena fluoroforom. Ovdje je fluorofor fluorescentno hemijsko jedinjenje koje može ponovo emitovati svjetlost nakon pobuđivanja svjetlosti. Kada se fluorofor veže sa ciljnim antigenom, omogućava detekciju ciljnog molekula u uzorku. Da se to dalje opiše, kada se antigen veže sa specifičnim antitelom, može se konjugovati sa fluoroforima. Stoga je lako otkriti prisustvo ciljnog antigena u uzorku kada se posmatra pod fluorescentnim mikroskopom.
Osim toga, postoje dva tipa imunofluorescencije; direktna i indirektna imunofluorescencija. Razlika između direktne i indirektne imunofluorescencije uglavnom leži u broju korištenih antitijela i konjugaciji fluorofora. To jest, u direktnoj imunofluorescenciji, fluorofor se direktno konjuguje sa primarnim antitelom, dok se u indirektnoj imunofluorescenciji fluorofor konjuguje sa sekundarnim antitelom.
Šta je direktna imunofluorescencija?
Imunofluorescencija koristi antitela za otkrivanje specifičnih ciljnih antigena. Direktna imunofluorescencija je jedna od dvije vrste imunofluorescencije. U direktnoj imunofluorescenciji, jedno antitijelo (primarno antitijelo) uključuje i fluorofor se direktno konjugira sa primarnim antitijelom. Nakon vezivanja antitela sa ciljnim antigenom, fluorofor emituje fluorescenciju koja se može detektovati fluorescentnim mikroskopom.
Slika 01: Direktna imunofluorescencija
Međutim, direktna imunofluorescencija je skupa metoda jer su primarna konjugirana antitijela skupa u poređenju sa sekundarnim antitijelima. Ipak, ne uključuje dodatni korak, dakle kraću tehniku. Nadalje, nespecifična vezivanja su smanjena u direktnoj imunofluorescenciji. Stoga je unakrsna reaktivnost vrsta niska. Ali u detekciji, osetljivost direktne imunofluorescencije je slaba u poređenju sa indirektnom imunofluorescencijom.
Šta je indirektna imunofluorescencija?
Indirektna imunofluorescencija je drugi tip imunofluorescencije koji uključuje dva tipa antitela kao što su primarna i sekundarna antitela u obeležavanju ciljnog antigena. U ovoj metodi, fluorofor se konjuguje sa sekundarnim antitelom. Dakle, ova tehnika uključuje dodatni korak.
Slika 02: Imunofluorescencija
Međutim, osjetljivost je visoka u ovoj metodi jer se nekoliko fluorofora može konjugirati sa sekundarnim antitijelima i to olakšava detekciju. Nadalje, indirektna imunofluorescencija je jeftinija zbog činjenice da je konjugacija sekundarnih antitijela jeftinija i lakša. U poređenju sa direktnom imunofluorescencijom, unakrsna reaktivnost vrsta je visoka kod indirektne metode.
Koje su sličnosti između direktne i indirektne imunofluorescencije?
- To su dvije vrste imunofluorescentne tehnike.
- Primarna antitijela i fluorofor uključeni u obje metode.
- Takođe, reakcija antigen-antitijelo se javlja u obje metode.
- Dalje, i direktna i indirektna imunofluorescencija koriste fluorescentni mikroskop za detekciju antigena.
Koja je razlika između direktne i indirektne imunofluorescencije?
Imunofluorescencija može biti direktna ili indirektna zasnovana na konjugaciji fluorofora sa korišćenim antitelima. U direktnoj imunofluorescenciji, fluorofor se konjugira sa primarnim antitijelom, koje je jedno antitijelo koje je uključeno u ovu tehniku. Za razliku od toga, kod indirektne imunofluorescencije, fluorofor se konjuguje sa sekundarnim antitelom, koje je jedna od dve vrste antitela koja su uključena u tehniku. Dakle, glavna razlika između direktne i indirektne imunofluorescencije je tip antitijela koja se konjugiraju s fluoroforom.
Sljedeća infografika pruža usporedbu razlike između direktne i indirektne imunofluorescencije.
Sažetak – direktna vs indirektna imunofluorescencija
Imunofluorescencija je tehnika koja se koristi za otkrivanje prisustva specifičnih antigena u uzorku. Ova tehnika koristi specifična antitijela. Stoga se u ovom slučaju antitijela konjugiraju s fluoroforima kako bi se otkrila pomoću fluorescentnog mikroskopa. Osim toga, postoje dvije vrste imunofluorescencije i to direktna i indirektna imunofluorescencija. Direktna imunofluorescencija uključuje jedno antitijelo i fluorofor direktno konjugiran na ovo antitijelo. Indirektna imunofluorescencija uključuje dva antitijela; primarni i sekundarni i fluorofor konjugiran sa sekundarnim antitijelom. Budući da se nekoliko sekundarnih antitijela može vezati s primarnim antitijelom, a nekoliko fluorofora može konjugirati sa sekundarnim antitijelima, indirektna imunofluorescencija je osjetljivija metoda od direktne metode. Nadalje, indirektna metoda je jeftinija od direktne metode. Dakle, ovo je razlika između direktne i indirektne imunofluorescencije.
