Ključna razlika – direktna naspram indirektne ELISA
Enzimski imunotest (ELISA), poznat i kao enzimski imunoesej, je serološki test koji otkriva antitela u krvi. Koristi se kao dijagnostički alat za otkrivanje da li je pacijent bio izložen određenoj vrsti virusa ili drugom infektivnom agensu (antigenu) i da li je tijelo proizvelo antitijela protiv infekcije. ELISA također može identificirati prošle i trenutne infekcije. Stoga se ELISA često koristi kao test pre skrininga od strane ljekara prije dubinske analize bolesti. Ovaj test se može obaviti u laboratoriji uzimanjem uzorka krvi od pacijenta. Postoje dvije vrste ELISA testa: direktna ELISA i indirektna ELISA. Ključna razlika između direktne i indirektne ELISA-e je ta što je indirektna ELISA osjetljivija i zahtijeva dodavanje sekundarnog antitijela, dok je direktna ELISA manje osjetljiva i koristi samo primarno antitijelo.
Šta je Direct ELISA?
ELISA je dijagnostički test bolesti koji se izvodi radi utvrđivanja prisutnosti određenih antigena ili antitijela u krvi. Radi se kao test na ploči. Koristi antitijela povezana s enzimima koji se lako mogu analizirati. Prisustvo antigena u uzorku seruma vezuje se za specifična antitela povezana sa enzimima. U završnom koraku dodaje se specifičan supstrat da reaguje sa enzimom. Enzim pretvara supstrat u obojeni proizvod ili proizvod koji proizvodi signal. Promjena boje u hemijskom supstratu otkriva prisustvo određenog antitijela u uzorku seruma. Direktni ELISA test koristi samo primarno antitijelo povezano s enzimom. Nakon vezivanja za antigen, brzo mijenja boju, što ukazuje na prisustvo infektivnog agensa u krvi. Međutim, intenzitet signala je slabiji kod direktnog ELISA testa jer su epitopi ograničeni na vezivanje antigena. Stoga je direktna ELISA manje osjetljiva u odnosu na indirektnu ELISA.
Slika 01: Direktni ELISA test
Šta je indirektna ELISA?
ELISA se može izvesti korištenjem dvije vrste antitijela, naime; primarnog i sekundarnog antitijela. Indirektna ELISA alatka koristi obje vrste antitijela za pojačavanje signala radi bolje detekcije. Indirektna ELISA tehnika se izvodi na sljedeći način.
- Ploče se inkubiraju sa antigenima i isperu kako bi se blokiralo nespecifično vezivanje.
- Zatim se dodaju primarna antitijela i isperu.
- Sekundarna antitijela vezana za enzime se dodaju i isperu.
- Doda se supstrat i pusti se da reaguje sa enzimima.
- Signali se detektuju i identifikuje se prisustvo ili odsustvo specifičnog antigena u uzorku.
U indirektnom ELISA testu, nekoliko sekundarnih antitela se može vezati za jedno primarno antitelo. Sekundarna antitijela su povezana sa enzimima koji se lako mogu analizirati. Stoga, jedno vezivanje može dati jak signal zbog više interakcija. Stoga je indirektna ELISA osjetljivija od direktne ELISA. Međutim, indirektna ELISA može dati nespecifične signale zbog unakrsnih reakcija sekundarnih antitijela.
Slika 02: Indirektni ELISA test
Koja je razlika između direktne i indirektne ELISA analize?
Direktna vs Indirektna ELISA |
|
| Direktna ELISA je manje osjetljiva u odnosu na indirektnu ELISA. | Indirektna ELISA je osjetljivija. |
| Zauzeto | |
| Direktni ELISA test je brz proces. | Indirektna ELISA je dugotrajna. |
| Upotreba antitela | |
| Samo jedan tip antitela (primarna antitela) se koristi u direktnoj ELISA testu. | Primarna i sekundarna antitela se koriste za indirektnu ELISA test. |
| Veza sa enzimima | |
| Primarna antitela su povezana sa enzimima. | Sekundarna antitela su povezana sa enzimima. |
| Unakrsna reaktivnost drugih antitela | |
| Direktna ELISA eliminiše unakrsnu reaktivnost drugih antitela. | Indirektna ELISA je zahvaćena unakrsnom reaktivnošću drugih antitela. |
| Signali | |
| Signali su slabi u poređenju sa indirektnom ELISA testom. | Signali se pojačavaju indirektnom ELISA testom. Stoga ga je lako otkriti. |
Sažetak – Direktna vs Indirektna ELISA
ELISA je biohemijska tehnika koja se koristi uglavnom u imunologiji za otkrivanje prisustva antitela ili antigena u uzorku krvi pacijenta. Može se izvesti putem dva procesa poznata kao direktna ili indirektna ELISA. Direktni ELISA test koristi samo primarna antitijela za otkrivanje antigena, dok indirektna ELISA koristi i primarna i sekundarna antitijela. U direktnoj ELISA-i, primarna antitijela su označena, dok su u indirektnoj ELISA sekundarna antitijela označena. Ovo je razlika između direktne i indirektne ELISA.
