Ključna razlika – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaze su nukleaze koje specifično razgrađuju RNK na manje jedinice. Mogu se podijeliti u dvije kategorije; endoribonukleaze i egzoribonukleaze. Endoribonukleaza je endonukleaza koja može razgraditi jednolančanu ili dvolančanu RNK. Cepa fosfodiestarske veze unutar RNA polinukleotidnog lanca. Primeri su RNaza A, RNaza III, RNaza T1, RNaza P i RNKaza H. Egzoribonukleaza je egzonukleaza koja je razgradila RNK uklanjanjem terminalnih nukleotida sa bilo 5' kraja ili 3' kraja RNK molekula. Primeri su RNaza R, RNaza II, RNaza D i RNaza PH. Ključna razlika između RNAZE A i RNAZE H je u tome što je RNAza A ribonukleaza pankreasa koja specifično razgrađuje jednolančanu RNK na manje komponente, dok je RNAza H nespecifični enzim koji cijepa RNA u RNA-DNK hibridu na manje jedinice putem hidrolitički mehanizam.
Šta je RNASE A?
RNase A je ribonukleaza pankreasa koja specifično cijepa nesparene ostatke citozina i uracila na 3’ kraju jednolančane RNK. RNaza H djeluje pri višoj koncentraciji soli (0,3M ili veća koncentracija NaCl). Hidrolitska reakcija je dva koraka. Formira 3’ fosforilirani proizvod preko 2’, 3’ cikličkog monofosfatnog intermedijera. Iako je specifičan za jednolančanu RNK pri višoj koncentraciji soli, može također razgraditi dvolančanu RNK i RNK u RNA-DNK hibridu pri nižoj koncentraciji NaCl (nižoj od 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield je prvi sintetizirao ovaj enzim. RNaza A je veoma popularan enzim u molekularnim istraživanjima. Goveđa pankreasna RNKaza A je primer RNaze A. I to je jedan od najotpornijih enzima koji se koriste u laboratoriji. Ovom enzimu nije potreban kofaktor za svoju aktivnost. To je visoko termostabilan enzim. RNaza A je prvi enzim i treći protein za koji je otkriven ispravan aminokiselinski slijed. Ovaj enzim je vrlo mali sa 124 aminokiseline i molekulskom masom od 12600da. I ima četiri ostatka histidina (His 12 i His 119 koji učestvuju u katalitičkoj reakciji).
Slika 01: RNase A
RNase A može se izolovati kuhanjem sirovog uzorka. Kada proključa, svi drugi enzimi razgrađuju preostalu RNazu A. RNaza A je neverovatno stabilan enzim. Ovaj enzim inhibira komplekse proteina inhibitora ribonukleaze, teških metala i uridin vanadata.
Šta je RNase H?
RNase H je nespecifični enzim ribonukleaze koji može razgraditi RNK u RNA-DNK hibridu putem hidrolitičke reakcije. RNKaza H cijepa 3’- O-P vezu RNK u RNA-DNK hibridu. Konačno proizvodi 3’OH i 5’ fosfatne terminirane proizvode. U replikaciji DNK igra ključnu ulogu uklanjanjem RNA prajmera nakon što se formiraju novi lanci DNK. U laboratorijskim uslovima, specifično razgrađuje RNK u RNA-DNK hibridu, ali ne i DNK i nehibridizovanu RNK. I ovaj enzim se obično koristi za uništavanje RNA šablona nakon što se formira prvi komplementarni lanac DNK tokom sinteze cDNK.
Slika 02: RNase H
RNase H se takođe koristi u testovima zaštite od nukleaze. Takođe se može uključiti u uklanjanje poli A repa iz mRNA. RNaza H ima sposobnost da uništi nekodirajuću RNK unutar i izvan ćelije. Metalni joni su potrebni kao kofaktori za ovu aktivnost proteina. Helator (EDTA) se može koristiti za inhibiciju enzima RNase H.
Koje su sličnosti između RNASE A i RNASE H?
- Obje su proteinske prirode.
- Oba su endoribonukleaza
- Oba mogu degradirati RNA.
- Oba vrše hidrolitičke reakcije.
- Molekularne laboratorije koriste oba ova.
Koja je razlika između RNASE A i RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNase A je ribonukleaza pankreasa koja specifično cijepa 3' kraj nesparenih citozinskih i uracilnih ostataka jednolančane RNK pri višoj koncentraciji soli. | RNase H je nespecifični enzim ribonukleaze koji može razgraditi RNK u RNA-DNK hibridu putem hidrolitičke reakcije. |
| Priroda cijepanja RNK | |
| RNase A specifično cijepa jednolančanu RNK pri višoj koncentraciji soli. | RNase H cijepa RNK u RNA-DNK hibridu. |
| Potreba za ko-faktorima za aktivnost | |
| RNase A ne treba kofaktore za svoju aktivnost. | RNase H treba metalne jone kao kofaktore za svoju aktivnost. |
| Inhibitori proteinske aktivnosti | |
| Protein inhibitora ribonukleaze, kompleksi teških metala i uridin vanadata inhibiraju aktivnost RNK-aze A. | A kelator (EDTA) inhibira aktivnost RNaze H. |
| Uklanjanje RNA prajmera u replikaciji DNK | |
| RNase A se ne koristi za uklanjanje RNA prajmera u replikaciji DNK. | RNase H se koristi za uklanjanje RNA prajmera u replikaciji DNK |
| Uklanjanje DNK predloška u sintezi komplementarne DNK (C-DNK) | |
| RNase A se ne koristi za uklanjanje RNA šablona tokom komplementarne DNK (C-DNK) sinteze. | RNase H se koristi za uklanjanje RNA šablona tokom komplementarne DNK (C-DNK) sinteze. |
| Uklanjanje poli-A-repa u mRNA hibridiziranoj u oligo (dt) | |
| RNase A se ne koristi za uklanjanje "poly-A repa" u mRNA hibridiziranoj u oligo (dt). | RNase H se koristi za uklanjanje “poli-A repa” u mRNA hibridiziranoj u oligo (dt) |
Sažetak – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaze su nukleazni enzimi koji imaju sposobnost da cijepaju RNK na manje jedinice. Oni su dva tipa; endoribonukleaze i egzoribonukleaze. Endoribonukleaza je endonukleaza koja ima sposobnost razgradnje jednolančane ili dvolančane RNK. I cijepa fosfodiestersku vezu unutar RNA polinukleotidnog lanca. RNaza A i RNaza H su dvije endoribonukleaze. RNaza A je ribonukleaza pankreasa koja specifično cijepa nesparene ostatke citozina i uracila na 3’ kraju jednolančane RNK pri višoj koncentraciji soli. RNaza H je nespecifični enzim ribonukleaze koji može razgraditi RNK u RNA-DNK hibridu putem hidrolitičke reakcije. Ovo je razlika između RNaze A i RNaze H.
Preuzmite PDF RNASE A vs RNASE H
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za vanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje Razlika između RNASE A i RNASE H
