Ključna razlika između kompetitivne i nekompetitivne ELISA je u tome što kompetitivna ELISA koristi inhibicijski antigen dok nekompetitivna ELISA ne koristi inhibicijski antigen za test.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) je imunološki test koji otkriva različite mete kao što su antitijela, antigeni, proteini i glikoproteini. To je brz i jednostavan način za izvođenje. Stoga se češće koristi u istraživačke i dijagnostičke svrhe. ELISA uključuje korištenje enzima i specifično vezivanje antitijela i antigena. Na osnovu načina na koji se reakcije odvijaju, postoje četiri tipa ELISA: direktna ELISA, indirektna ELISA, sendvič ELISA i inhibiciona ELISA. Direktna, indirektna i sendvič ELISA su tipovi nekompetitivne ELISA, dok je inhibiciona ELISA vrsta kompletne ELISA. Glavni cilj ovog članka je raspraviti razliku između kompetitivne i nekonkurentne ELISA.
Šta je kompetitivna ELISA?
Kompetitivna ELISA mjeri koncentraciju antigena u uzorku kroz detekciju interferencije signala. Ovdje se u analizi koristi inhibitorni antigen. Dakle, to je tip inhibicije ELISA. Tokom ove procedure, antigeni prisutni u uzorku se nadmeću sa odabranim referentnim antigenom za vezivanje za određenu količinu obeleženog antitela. Nadalje, ovaj postupak započinje inkubacijom uzorka, sa viškom obilježenog antitijela. Takođe, referentni antigen treba prethodno premazati na ploči za analizu sa više jažica. Zatim mješavinu uzorka treba dodati na ploču za analizu koja sadrži referentni antigen. Slobodna antitela će se vezati za referentni antigen u zavisnosti od količine antigena u uzorku. Dakle, ako je prisutno više antigena uzorka, detektovaće se manje referentnog antigena. Dakle, stvara slabiji signal.
Slika 01: ELISA
Nasuprot tome, kada uzorak sadrži manju količinu antigena, sve više i više referentnog antigena će zauzeti antitijela i dati jak signal. Budući da kompetitivna ELISA daje jači signal kada uzorak sadrži malu količinu antigena, kompetitivna ELISA je vrlo osjetljiva analiza, čak i za uzorke s malim brojem antigena.
U nekim kompetitivnim ELISA setovima, označeni antigen se koristi umjesto obilježenog antitijela. Ovdje će se označeni antigen i antigen uzorka nadmetati za vezivanje za primarno antitijelo. Slično, kada je količina antigena u uzorku niska, količina obilježenog antigena koji se vezuje za antitijela bit će veća i stvoriti jači signal.
Šta je nekonkurentna ELISA?
Među četiri tipa ELISA, tri tipa su nekonkurentna ELISA. To su direktna ELISA, indirektna ELISA i sendvič ELISA. Sva tri formata rade prema zajedničkom principu ELISA-e sa malim razlikama u njihovim metodologijama.
Direktna ELISA koristi primarno antitijelo označeno enzimom. Dakle, nije potrebno sekundarno antitelo. Stoga je direktna ELISA brža od drugih tipova ELISA. Primarno antitijelo će se direktno vezati za imobilizirani ciljni antigen koji je prisutan u ploči. Dakle, reakcija enzim-supstrat će se odigrati, proizvodeći vidljiv signal.
Slika 02: Sendvič ELISA
Za razliku od direktne ELISA-e, indirektna ELISA koristi neobilježeno primarno antitijelo i sekundarno antitijelo označeno enzimom. Kada se primarno antitijelo veže za imobilizirani antigen, sekundarno antitijelo se veže za primarno antitijelo. Enzim u sekundarnom antitelu će reagovati sa antigenom i proizvesti vidljiv signal. Sendvič ELISA se razlikuje od direktnog i indirektnog ELISA testa. Ovdje se antitijelo imobilizira na zid ploče za analizu.
Koje su sličnosti između kompetitivne i nekonkurentne ELISA analize?
- Kompetitivna i nekompetitivna ELISA su dvije vrste tehnika imunosorbentnog testa.
- One su veoma fleksibilne i osjetljive tehnike.
- Dalje, i kompetitivna i nekompetitivna ELISA su enzimski imunotestovi.
- Takođe, obje metode generiraju signal zbog reakcije enzim-supstrat.
Koja je razlika između kompetitivne i nekonkurentne ELISA analize?
Kompetitivna ELISA je vrsta ELISA-e koja se oslanja na završetak između antigena analita i obilježenog antigena za ograničenu količinu specifičnog antitijela. S druge strane, ne postoji takva konkurencija između antigena od interesa i referentnog antigena u nekompetitivnom ELISA testu. Dakle, ovo je ključna razlika između kompetitivne i nekonkurentne ELISA. Slično, kompetitivna ELISA je inhibicijska ELISA, dok nekompetitivna ELISA nije inhibicijska ELISA. Dakle, ovo je također razlika između kompetitivne i nekonkurentne ELISA.
Štaviše, kompetitivna ELISA je prikladnija za mjerenje male količine antigena od interesa. To je osjetljiva metoda. S druge strane, nekompetitivna ELISA ne zavisi od broja antigena prisutnih u uzorku. Dakle, ovo je također razlika između kompetitivne i nekonkurentne ELISA.
Infografika ispod objašnjava razliku između kompetitivne i nekonkurentne ELISA analize.
Sažetak – konkurentski vs nekonkurentski ELISA
Kompetitivna i nekompetitivna ELISA su dvije glavne vrste ELISA-e ili enzimski vezanih imunosorbentnih testova. Sumirajući razliku između kompetitivne i nekompetitivne ELISA, kompetitivna ELISA se oslanja na konkurenciju između antigena od interesa i referentnog antigena prema ograničenoj količini antitela. Stoga se kompetitivna ELISA takođe naziva inhibiciona ELISA. S druge strane, nekompetitivna ELISA se ne oslanja na konkurenciju između ciljnih antigena i referentnih antigena. Koristi višak obilježenih specifičnih antitijela prema analitu od interesa. Dakle, ovo je ključna razlika između kompetitivne i nekonkurentne ELISA. Direktna ELISA, indirektna ELISA i sendvič ELISA su tri glavna tipa nekompetitivne ELISA.
