Ključna razlika – gel elektroforeza vs SDS stranica
Gel elektroforeza je tehnika koja razdvaja makromolekule u električnom polju. To je uobičajena metoda u molekularnoj biologiji za odvajanje DNK, RNK i proteina iz mješavina prema njihovoj molekularnoj veličini. SDS stranica je vrsta gel elektroforeze koja se koristi za odvajanje proteina iz mješavine proteina na osnovu njihove veličine. Gel elektroforeza je termin koji se koristi za označavanje normalne tehnike koja se primjenjuje za odvajanje DNK, RNK i proteina, dok je SDS stranica jedna vrsta gel elektroforeze. Ovo je ključna razlika između gel elektroforeze i SDS stranice.
Šta je gel elektroforeza?
Gel elektroforeza je uobičajena tehnika koja se koristi u laboratorijama za odvajanje nabijenih molekula kao što su DNK, RNK, proteini, itd. iz njihovih mješavina. Gel se koristi u gel elektroforezi. Djeluje kao molekularno sito. Postoje dvije vrste gelova koji se koriste u gel elektroforezi, a to su agaroza i poliakrilamid. Odabir gela i preparata gela važni su faktori koje treba uzeti u obzir u gel elektroforezi, budući da veličinom pora gela treba pažljivo manipulirati za dobro odvajanje molekula putem gel elektroforeze. Gel elektroforeza ima električno polje povezano na dva kraja gela. Jedan kraj gela pokazuje pozitivno naelektrisanje dok je drugi kraj negativno naelektrisan.
DNK i RNA su negativno nabijeni molekuli. Kada se ubace u gel s negativnog kraja gela i primjenjuju na električno polje, migriraju kroz pore gela prema pozitivno nabijenom kraju gela. Brzina migracije ovisi o naboju i veličini molekula. Manji molekuli lako migriraju kroz pore gela od većih molekula. Dakle, manji molekuli putuju dugu udaljenost kroz gel, a veći molekuli putuju kratku udaljenost. Za promatranje putovanja molekula po gelu koriste se posebne vrste boja. Električno polje se primjenjuje na određeni vremenski period i zaustavlja se kako bi se spriječio gubitak molekula i kako bi se molekuli zadržali na njihovim putovanim pozicijama. U gelu se mogu uočiti različite trake. Ove trake predstavljaju molekule različitih veličina. Stoga je gel elektroforeza korisna za razlikovanje molekula prema njihovoj veličini.
Gel elektroforeza je ugrađena u različite tehnike kao preparativne tehnike u molekularnoj biologiji kao što su PCR, RFLP, kloniranje, sekvenciranje DNK, Southern blotting, mapiranje genoma, itd.
Slika 01: Agarozna gel elektroforeza
Šta je SDS stranica?
Natrijum dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforeza (SDS stranica) je vrsta gel elektroforeze koja se koristi za odvajanje proteina. Kada se gel elektroforeza koristi za razdvajanje proteina, potrebni su posebni tretmani jer proteini nisu negativno nabijeni kao DNK i RNA i ne migriraju prema pozitivnom ili negativnom kraju. Dakle, proteini se denaturiraju i oblažu negativnim nabojem prije gel elektroforeze. Radi se pomoću deterdženta koji se zove natrijum dodecil sulfat (SDS). Gel elektroforeza koja koristi SDS i poliakrilamidni gel za podlogu poznata je kao SDS Page. Ova tehnika se obično koristi u biohemiji, genetici, forenzici i molekularnoj biologiji.
Tokom SDS stranice, proteini se miješaju sa SDS-om. SDS razvija proteine u linearni oblik i oblaže ih negativnim nabojem proporcionalnim njihovoj molekularnoj masi. Zbog negativnog naboja, proteinski molekuli migriraju prema kraju pozitivnog naboja gela i odvajaju se prema njihovoj molekularnoj masi. U SDS stranici, poliakrilamid se koristi kao čvrsta podloga za gel. Stvarno odvajanje proteina uglavnom zavisi od svojstava gela. Stoga pripremu poliakrilamidnog gela treba pažljivo obaviti i koristiti ispravne koncentracije poliakrilamida. Poliakrilamidni gelovi pokazuju visoku rezoluciju od agaroznih gelova. Stoga se SDS stranica smatra tehnikom visoke rezolucije za odvajanje proteina.
SDS stranica je vrsta denaturirajuće gel elektroforeze. Ima veliko ograničenje u analizi proteina. Budući da SDS denaturira proteine prije odvajanja, on ne dozvoljava otkrivanje enzimske aktivnosti, interakcija vezanja proteina, proteinskih kofaktora, itd.
Slika 02: SDS stranica
Koja je razlika između gel elektroforeze i SDS stranice?
Gel elektroforeza vs SDS stranica |
|
| Gel elektroforeza je metoda koja se izvodi za razdvajanje makromolekula pomoću električnog polja. | SDS stranica je tehnika gel elektroforeze visoke rezolucije koja se koristi za odvajanje proteina na osnovu njihove mase. |
| Gel Run | |
| Može se izvoditi na horizontalan ili vertikalni način. | SDS stranica uvijek radi okomito. |
| Osnova za razdvajanje | |
| Razdvajanje se dešava prema punjenju i veličini. | Razdvajanje proteina se dešava prema masi i naboju. |
| Rezolucija | |
| Agarozna gel elektroforeza ima nisku rezoluciju, a poliakrilamid gel elektroforeza ima veću rezoluciju | SDS stranica ima bolju rezoluciju. |
| Denaturacija | |
| Gel elektroforeza uključuje tehnike denaturiranja i nedenaturiranja. | SDS stranica denaturira proteine prije razdvajanja. |
Sažetak – Gel elektroforeza vs SDS stranica
Gel elektroforeza je uobičajena tehnika koja se koristi za odvajanje i analizu DNK, RNK i proteina na osnovu njihove veličine i naboja. Postoje dvije glavne vrste gel elektroforeze, a to su elektroforeza u agaroznom gelu i elektroforeza u poliakrilamidnom gelu. Agarozni gelovi se uglavnom koriste za odvajanje nukleinskih kiselina; kada je potrebna veća rezolucija, koriste se poliakrilamidni gelovi. SDS stranica je vrsta gel elektroforeze koja se obično koristi za odvajanje složenih mješavina proteina. Smatra se tehnikom odvajanja proteina visoke rezolucije. Ovo je razlika između gel elektroforeze i SDS stranice.
