Ključna razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi je u tome što su radioaktivne sonde jednolančane DNK ili RNK sekvence koje su označene radioaktivnim izotopima dok su neradioaktivne sonde jednolančane DNK ili RNK sekvence koje su označene hemijskom oznakom ili fluorescentna oznaka.
Hibridizacija nukleinske kiseline je važna tehnika u molekularnoj biologiji, posebno u mikrobnoj dijagnostici. Pomaže u identifikaciji ili otkrivanju određene sekvence nukleinske kiseline. U ovoj tehnici, nukleinske kiseline se fiksiraju na čvrstu površinu i hibridiziraju pomoću sonde. Sonda je fragment DNK ili RNK koji je komplementaran sekvenci od interesa. Ako je ciljna sekvenca prisutna u uzorku, sonda će se hibridizirati s njom i učiniti je detektabilnom. Postoje dvije vrste sondi kao radioaktivne i neradioaktivne sonde. Stoga, sonde možemo označiti radioaktivnom ili fluorescentnom oznakom.
Šta su radioaktivne sonde?
Radioaktivne sonde su jednolančani DNK ili RNK fragmenti sa radioaktivnom oznakom. Radioizotopi se koriste za pripremu radioaktivnih sondi. Radioizotopi 32P, 33P i 35S se obično koriste u označavanju sondi. Štaviše, radioizotopi 3H i 1251 se također koriste u manjoj mjeri u označavanju sondi. Ali oni se koriste za specifične aplikacije. Među različitim radioizotopima, 32P je najčešće korišteni izotop u označavanju radioaktivnih sondi.
Radioaktivne sonde pružaju viši stepen pouzdanosti i specifičnosti. Stoga, oni pružaju maksimalnu osjetljivost i omogućavaju preciznu kvantifikaciju ciljnih sekvenci. Međutim, postoji nekoliko nedostataka vezanih za radioaktivne sonde. Imaju kratak poluživot. Štaviše, oni su opasni i proizvodnja, upotreba i odlaganje su problematični prilikom rukovanja. Osim toga, priprema radioaktivne sonde je skup proces. Stoga, zbog sigurnosnih problema i troškova, radioaktivne sonde se danas ne koriste kao neradioaktivne sonde.
Šta su neradioaktivne sonde?
Neradioaktivne sonde su drugi tip sondi koje su hemijski označene. Digoksigenin je neradioaktivna sonda, koja je marker zasnovan na antitijelima. Digoksigeninske sonde su specifične i osjetljive. Biotin je još jedna oznaka koja se koristi u pripremi neradioaktivne sonde. Sistemi za biotin/streptavidin i digoksigenin/detekciju antitela su najčešće korišćene neradioaktivne sonde u hibridizaciji. Nadalje, sistem peroksidaze hrena je još jedan neradioaktivni sistem sonde. Jednom kada se ove neradioaktivne sonde hibridiziraju s ciljnim sekvencama, mogu se otkriti putem autoradiografije ili drugih tehnika snimanja.
Slika 01: Hibridizacija sa neradioaktivnim sondama
Neradioaktivne sonde se češće koriste u hibridizaciji nukleinskih kiselina nego radioaktivne sonde. To je zato što neradioaktivne sonde nisu povezane s opasnim materijalima. Nadalje, metode neradioaktivne detekcije zahtijevaju kraće vrijeme izlaganja da bi se otkrio hibridizacijski signal. Međutim, koraci uključeni u hibridizaciju DNK sa neradioaktivnim sondama obično su zamorni i dugotrajni. Štaviše, komercijalno dostupna rješenja su skupa.
Koje su sličnosti između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi?
- Radioaktivne i neradioaktivne sonde su dvije vrste sondi koje se koriste u hibridizaciji nukleinskih kiselina.
- One olakšavaju detekciju ciljnih sekvenci u uzorku.
- Obje vrste sondi su podjednako osjetljive i specifične.
Koja je razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi?
Radioaktivne sonde su jednolančane DNK ili RNK sekvence označene radioaktivnim izotopima, dok su neradioaktivne sonde jednolančane DNK ili RNK sekvence označene hemijskom oznakom. Dakle, ovo je ključna razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi. Takođe, radioaktivni izotopi su opasni. Dakle, radioaktivne sonde su prilično opasne, dok neradioaktivne sonde nisu opasne.
Štaviše, još jedna razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi su njihovi nedostaci. Kratki poluživot i opasnosti povezane s njihovom proizvodnjom, upotrebom i odlaganjem su nedostaci korištenja radioaktivnih sondi. S druge strane, koraci uključeni u hibridizaciju DNK sa neradioaktivnim sondama obično su zamorni i dugotrajni.
U infografici ispod prikazano je više poređenja vezanih za razliku između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi.
Sažetak – Radioaktivne vs neradioaktivne sonde
Proba je fragment DNK ili RNK koji sadrži nukleotidnu sekvencu koja je komplementarna sekvenci od interesa. Da bi se otkrila ciljna sekvenca, sonde se mogu označiti radioaktivno, fluorescentno ili hemijski. Sonde se vezuju za komplementarne sekvence u uzorku. Radioaktivne sonde su označene radioaktivnim izotopima, dok su neradioaktivne sonde označene biotinom, digoksigeninom ili peroksidazom hrena. Dakle, ovo je ključna razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi.
