Ključna razlika – prolazna vs stabilna transfekcija
Transfekcija je proces koji je uključen u prijenos gena eukariotskih stanica korištenjem kemijskih ili fizičkih metoda. Transfekcija se može klasificirati u dvije glavne vrste: prolazna transfekcija i stabilna transfekcija. Tokom prolazne transfekcije, gen od interesa ne uspeva da se integriše sa genomom domaćina i kratkotrajno se eksprimira unutar domaćina, dok se, u stabilnoj transfekciji, gen od interesa integriše sa genomom domaćina i održava se dugo vremena u nekoliko generacija.. Ovo je ključna razlika između prolazne i stabilne transfekcije. U oba slučaja, transfekcija je uspješna i geni su izraženi.
Šta je prolazna transfekcija?
Transfekcija je važan alat za ubacivanje gena u eukariotske ćelije. Među dvije vrste transfekcije, prolazna transfekcija je uobičajen način u prijenosu gena. Putem vektora, strani geni se transformišu unutar ćelija domaćina. Kada strana DNK uđe u ćeliju domaćina, ima dvije mogućnosti. Može se ili integrirati s genomom domaćina i replicirati, ili ostati unutra bez integracije u genom. Prolazna transfekcija pokazuje privremenu ekspresiju umetnutih gena bez integracije u genom domaćina. Geni eksprimiraju i proizvode kodirani protein sve dok se stanica ne podijeli. Međutim, zbog nemogućnosti integracije, ne može se replicirati i ući u buduće generacije. Ova vrsta transfekcije je uspješna u kratkom vremenskom periodu. Prilikom diobe ćelije ili zbog nekih drugih faktora, strana DNK je podvrgnuta degradaciji. Prolazna transfekcija je prikazana kada je strana DNK u obliku visoko namotane DNK.
Slika 01: Prolazna transfekcija
Šta je stabilna transfekcija?
Stabilna transfekcija pokazuje uspješnu integraciju stranih gena u genom domaćina. Kada strana DNK uđe u ćeliju domaćina, dio strane DNK se integrira sa genomom domaćina i postaje njegov dio. Stoga se strana DNK također replicira i prelazi u buduće generacije kada se genom domaćina replicira. Ova vrsta transfekcije je složena i rijetka. Međutim, zbog stabilne transfekcije u genom, ova osobina se održava u dužem periodu od nekoliko generacija.
Stabilna transfekcija je težak proces i zahteva efikasnu isporuku DNK i ćelijsko preuzimanje stranog DNK u svoj genom. Dakle, linearna DNK favorizuje stabilnu transfekciju od kružne DNK. Međutim, stabilna stopa transfekcije je otprilike jedna od 104 transformiranih ćelija. Stabilna transfekcija se može posmatrati kotransformacijom selektabilnog markera i izvođenjem veštačke selekcije na medijumu.
Slika 02: Stabilna transfekcija
Koja je razlika između prolazne i stabilne transfekcije?
Prilazna vs stabilna transfekcija |
|
| Strana DNK se ne integriše u genom domaćina. | Strana DNK se integriše sa genomom domaćina i postaje njegov dio. |
| Replikacija unutar hosta | |
| Tranzitorno transficirani geni se ne repliciraju unutar domaćina. Stoga se geni ne prenose na sljedeće generacije. | Geni se repliciraju unutar domaćina i prenose na buduće generacije. |
| Vremensko trajanje genske ekspresije | |
| Geni se izražavaju u ograničenom vremenskom periodu i nakon toga se uništavaju. | Geni postaju dio genoma i izražavaju se unutar generacije tokom dužeg vremenskog perioda. |
| Koristi | |
| Ovo je korisno za proučavanje efekata kratkoročne ekspresije gena ili genskih proizvoda. | Ovo je korisno za dugoročno proučavanje efekata ekspresije gena. |
| Otkrivanje transfekcije | |
| Geni su izraženi i mogu se lako otkriti umetanjem reporterskog gena. | Stabilna transfekcija se može lako otkriti umetanjem markera koji se može odabrati i odabirom kroz umjetnu selekciju na mediju. |
| Pojava i proces | |
| Prolazna transfekcija je uobičajena i nije složena za izvođenje. | Stabilna transfekcija je rijetka i složena za izvođenje. |
| Priroda DNK | |
| Jako namotana DNK pogodna je za prolaznu transfekciju. | Linearni DNK su pogodni za stabilnu transfekciju. |
| Prijave | |
| Ovo se koristi za studije uništavanja gena ili utišavanja sa inhibitornim RNK, proizvodnje proteina u maloj mjeri | Ovo se koristi za proizvodnju proteina u velikim, dugoročnim farmakološkim studijama, genskoj terapiji, istraživanju mehanizama dugoročne genetske regulacije |
Sažetak – prolazna vs stabilna transfekcija
Prolazne i stabilne transfekcije su dvije vrste transfekcija koje se pokazuju tokom prijenosa gena u eukariotske ćelije ne-virusnim sistemima. Transformisana strana DNK nije integrisana sa genomom domaćina u prolaznoj transfekciji, dok se integriše sa genomom domaćina u stabilnoj transfekciji. Kružna umotana DNK je prikazana kao prolazna transfekcija, dok linearna DNK preferira stabilnu transfekciju. Ovo je razlika između prolazne i stabilne transfekcije. Međutim, prolazna transfekcija je češća i lakša u poređenju sa stabilnom transfekcijom. Ali odabir jednog između dva zavisi od svrhe transfera gena i trajanja istraživačkog projekta.
