Transformacija vs Transfekcija
Transformacija i transfekcija su dvije jednostavne tehnike koje se koriste za uvođenje stranog gena u ćeliju domaćina. Međutim, ove tehnike zavise od tipa domaćina ili vektorskih sistema.
Šta je transformacija ćelije?
Transformacija je tehnika koja se koristi za uvođenje gena u ćelije kvasca i bakterija. Ova tehnika obično uzrokuje nasljedne promjene u genima, pa je ekspresija gena trajna. Bakterijsku transformaciju prvi je uveo Frederick Griffith 1928. godine. Zatim, početkom 1970-ih, ova tehnika je korištena u E.coli. Tokom procesa transformacije E. coli, ćelije su natopljene ledeno hladnom otopinom CaCl2 Ovaj korak čini ćelije E.coli kompetentnim. Nakon toga, kompetentne ćelije se pomešaju sa plazmidnom DNK i inkubiraju na ledu 20-30 min. Zatim se daje kratki toplotni šok kako bi se omogućio prijenos DNK u ćeliju. Na kraju, ćelije se stavljaju u hranljivu juhu i inkubiraju na 37 °C 60-90 min kako bi se uspostavili plazmidi. Kada se ovi koraci uspješno završe, transformirane ćelije se mogu staviti na odgovarajući medij za razmnožavanje ćelija. Pošto se transformacija smatra neefikasnom tehnikom, ne može se koristiti za pripremu banaka klonova.
Šta je transfekcija ćelije?
Transfekcija je metoda uvođenja stranog gena, obično, u ćelije sisara. Postoje dvije metode transfekcije; naime, prolazna transfekcija i stabilna transfekcija. Kod prolazne transfekcije, ekspresija gena je dostupna ograničeno vrijeme; tako, izmjena gena uzrokuje privremenu ekspresiju. Ova metoda transfekcije je jednostavna i brza; stoga se može koristiti rutinski. Jedan nedostatak prolazne transfekcije je teškoća primjene za velike sisteme sinteze proteina.
Tokom stabilne transfekcije, ciljni gen je integrisan u genom ćelije domaćina, pa je ekspresija gena trajna, za razliku od prolazne transfekcije.
Koja je razlika između Transformacije i Transfekcije?
• Transformacija je uvođenje gena u prokariotsku ćeliju (bakterijsku i kvasnu), dok se transfekcija obično naziva uvođenje gena u ćeliju sisara.
• Transformacija rezultira nasljednim promjenama u genima, dok transfekcija može rezultirati ili privremenim ili trajnim promjenama u genima.
