Ključna razlika – horizontalna vs vertikalna gel elektroforeza
Gel elektroforeza je laboratorijska tehnika koja se koristi u genetici za odvajanje mješavina koje sadrže DNK, RNK i druge proteine prema njihovom naboju i veličini molekula. DNK, RNK ili proteini koje je potrebno odvojiti ovom metodom prolaze kroz gel koji sadrži male pore. Molekule se pokreću kroz gel pomoću električnog polja. Molekuli prolaze kroz pore gela, a brzina kretanja je obrnuto proporcionalna njihovim dužinama. Stoga će se molekuli manje veličine kretati brže od molekula veće molekularne težine. Električno polje se stvara razlikom naboja na dva kraja gela. Jedan kraj sadrži pozitivan naboj, a drugi kraj sadrži negativan naboj. Budući da su molekule DNK i RNK negativno nabijene, oni će biti privučeni prema pozitivno nabijenom kraju gela. Gel elektroforeza može biti dvije različite metode: horizontalna gel elektroforeza i vertikalna gel elektroforeza. U horizontalnoj gel elektroforezi, gel je prisutan u horizontalnoj orijentaciji i potopljen je u kontinuirani pufer koji se nalazi unutar same kutije gela. Kod vertikalne gel elektroforeze, puferski sistem je orijentisan okomito i diskontinuiran sa dve komore prisutne na vrhu i dnu sa katodom i anodom, respektivno. Ovo je ključna razlika između horizontalne i vertikalne gel elektroforeze.
Šta je horizontalna gel elektroforeza?
Horizontalna gel elektroforeza koristi osnovnu teoriju za odvajanje DNK, RNK ili proteinskih molekula prema njihovoj molekularnoj veličini i naboju. U ovoj tehnici, gel je prisutan u horizontalnoj orijentaciji i potopljen je u pufer koji je kontinuiran. Agarozni gel se koristi za razdvajanje kutije za gel u dva odjeljka. Jedan kraj kutije sa gelom sadrži anodu, dok drugi kraj sadrži katodu. Kada se primeni struja, bafer koji se koristi u ovoj tehnici omogućava stvaranje gradijenta naelektrisanja. Kada se nanese punjenje, gel ima tendenciju zagrijavanja. Pufer takođe funkcioniše kao rashladna tečnost, koja održava temperaturu na optimalnom nivou. Recirkulacija tekućeg pufera sprečava stvaranje pH gradijenta. Diskontinuirani puferski sistem se ne može koristiti u horizontalnoj gel elektroforezi jer su dva odjeljka gel sistema povezana s tekućim puferom. Akrilamid se koristi tokom gel elektroforeze za odvajanje proteinskih mješavina.
Slika 01: Horizontalna gel elektroforeza
U horizontalnoj gel elektroforezi, akrilamid se ne može koristiti jer je kutija za gel izložena kiseoniku. Zbog prisustva kiseonika, polimerizacija akrilamida je inhibirana, a to ometa stvaranje gela. Horizontalna gel elektroforeza je metoda bez napora koja se koristi u razdvajanju DNK i RNK.
Šta je vertikalna gel elektroforeza?
Tehnika vertikalne gel elektroforeze funkcioniše prema primarnoj teoriji gel elektroforeze, ali se smatra složenijom od metode horizontalne gel elektroforeze. Ova tehnika koristi diskontinuirani bafer. Katoda se nalazi u gornjoj komori, a anoda u donjoj komori. Elektrode prisutne u svakom odjeljku osiguravaju potrebno električno polje. Tanki sloj gela se sipa između dvije postavljene staklene ploče. Stoga je gornji dio gela potopljen u gornju komoru, a donji dio gela je potopljen u komoru na dnu. Kada se primeni struja, mali deo pufera se kreće u donju komoru iz gornje komore kroz gel. Struja primijenjena u ovoj tehnici je u minutnim jedinicama.
Slika 02: Vertikalna gel elektroforeza
U vertikalnoj gel elektroforezi, pufer teče samo kroz gel. Ovo omogućava preciznu kontrolu gradijenta napona tokom faze razdvajanja. Akrilamidni gel se može koristiti jer odeljci nisu izloženi atmosferskom kiseoniku. Zbog manje veličine pora akrilamidnog gela, precizno odvajanje se može postići uz veću rezoluciju.
Koje su sličnosti između horizontalne i vertikalne gel elektroforeze?
- Oba sistema funkcionišu prema osnovnoj teoriji gel elektroforeze.
- Anoda i katoda se koriste da obezbede potrebno električno polje u oba sistema.
Koja je razlika između horizontalne i vertikalne gel elektroforeze?
Horizontalna vs vertikalna gel elektroforeza |
|
| Horizontalna gel elektroforeza je tehnika gel elektroforeze u kojoj je gel prisutan u horizontalnoj orijentaciji. | Vertikalna gel elektroforeza je tehnika gel elektroforeze u kojoj je gel orijentisan okomito. |
| Buffer | |
| Horizontalna gel elektroforeza se sastoji od kontinuiranog pufera. | Pokretni pufer je diskontinuiran u vertikalnoj gel elektroforezi. |
| Upotreba akrilamida | |
| Akrilamid se ne može koristiti za horizontalnu gel elektroforezu jer je kutija za gel izložena atmosferskom kiseoniku. | Pošto gel nije izložen atmosferskom kiseoniku zbog dve odvojene komore, akrilamid bi se mogao koristiti za vertikalnu gel elektroforezu. |
| Funkcija | |
| Horizontalna gel elektroforeza se češće koristi za odvajanje mješavine DNK i RNK, ali ne i proteina. | Vertikalna gel elektroforeza se koristi za odvajanje mješavine proteina. |
Sažetak – Horizontalna vs vertikalna gel elektroforeza
Gel elektroforeza je laboratorijska tehnika koja se široko koristi u odvajanju mješavina koje sadrže molekule DNK, RNK i proteina. Postoje dvije metode gel elektroforeze: horizontalna i vertikalna gel elektroforeza. U horizontalnoj gel elektroforezi, tekući pufer je kontinuiran, dok je kod vertikalne gel elektroforeze diskontinuiran. Ovo je razlika između horizontalne i vertikalne gel elektroforeze. Oba sistema funkcionišu prema zajedničkom principu gel elektroforeze.
Preuzmite PDF verziju horizontalne vs vertikalne gel elektroforeze
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za vanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje Razlika između horizontalne i vertikalne gel elektroforeze.
