Ključna razlika – Phusion vs Taq Polymerase
DNK polimeraze su enzimi koji se široko koriste u tehnikama molekularne biologije i takođe su prirodno prisutne u svim organizmima koji prolaze kroz replikaciju DNK. Oni su ključni enzimi za polimerizaciju koji uključuju tokom replikacije. DNK polimeraza je sposobna da doda nukleotide na slobodni 3’ kraj lanca DNK i na taj način prouzrokuje produžetak novog lanca. Trenutno, zbog razvoja molekularne biologije u dijagnostici bolesti i industrijskoj primjeni, važno je proizvoditi polimeraze koje imaju različita korisna svojstva. Ovo povećava tačnost metode i čini je bržom tehnikom. Phusion i Taq polimeraza su dva komercijalno proizvedena termostabilna polimeraza enzima koji se koriste u posebnim molekularnim aplikacijama. Phusion je DNK polimeraza izolirana iz Pyrococcus furiosus i uglavnom se koristi u eksperimentima kloniranja kako bi se povećala vjernost. Taq DNK polimeraza je standardna DNK polimeraza koja se koristi u lančanoj reakciji polimeraze (PCR) i izolirana je iz termostabilne bakterije; Thermus aquaticus. Ključna razlika između dva enzima je izvorni mikroorganizam. Phusion je izoliran od ekstremofila, Pyrococcus furiosus, dok je Taq polimeraza izolirana od termofila, Thermus aquaticus.
Šta je Phusion?
Phusion DNK polimeraza je nova polimeraza koja se proizvodi izolacijom enzima iz Pyrococcus furiosus, koji je ekstremofilna Archaea. Ovi mikrobi žive u uslovima ekstremno visokih temperatura, čineći polimerazu visoko stabilnom polimerazom. Phusion polimeraza se koristi za postizanje ekstremne vjernosti u odnosu na konvencionalnu termostabilnu polimerazu; Taq polimeraza. Phusion polimeraza je sposobna da pojača dugačke šablone do 7,5 kb genomske DNK. Optimalni kapacitet polimerizacije Phusion polimeraze je na 720 C. Phusion se također koristi u proizvodima za kloniranje za sekvenciranje, analizu ekspresije i analizu mutacija.
Phusion DNK polimeraza ima aktivnost egzonukleaze 3’ – 5’. Ovo omogućava lektoriranje novosintetiziranog lanca nakon sinteze. Dakle, neslaganja nukleotida se lako mogu popraviti. Dakle, ima manju stopu grešaka. Sveukupne prednosti Phusion polimeraze su:
- Extreme Fidelity
- Velika brzina i smanjeno vrijeme produženja
- Robusne reakcije i zahtijeva minimalnu optimizaciju
- Visoki prinos
Slika 01: Phusion
Glavni nedostatak Phusion polimeraze je to što je inhibirana u prisustvu deoksiuridin trifosfata (dUTP). Kada se dUTP akumulira u reakcionoj smjesi, može inhibirati djelovanje Phusion polimeraze. Ovo se sprečava tretiranjem reakcione smeše sa dUTPazom pre dodavanja enzima. Trenutno se varijanta Phusion polimeraze otporna na dUTP poznata kao Pfu Turbo umjesto Phusion polimeraze kao lijek za ovaj problem.
Šta je Taq Polymerase?
Taq pronalazak DNK polimeraze napravio je revoluciju u polju molekularne biologije. To je riješilo veliki problem u amplifikaciji DNK. Taq DNK polimeraza je enzim polimeraze stabilan na toplinu ekstrahiran i izoliran iz termofilne bakterije Thermus aquaticus. Otkriće ovih enzima dovodi do razvoja PCR-a. Ovaj enzim je omogućio upotrebu lančane reakcije polimeraze u amplifikaciji DNK umjesto konvencionalnih napornih tehnika kloniranja. PCR se sada koristi u molekularnoj dijagnostici, poljoprivrednim i industrijskim poljima sa mnogim novim varijacijama koje su dodane tehnici.
Slika 02: Taq polimeraza
Taq DNK polimeraza funkcionira na optimalnom temperaturnom rasponu između 720C – 800C. Taq DNK polimeraza zahtijeva kofaktor; magnezija za njegovu funkciju. Taq polimeraza nema sposobnost lektoriranja od 3' – 5', stoga je stopa greške Taq DNK polimeraze visoka u poređenju sa novijim tipovima DNK polimeraza kao što je Phusion polimeraza itd. Ali, popularnost Taq DNK polimeraze ostaje isti u cijelom svijetu nauke zbog pogodnosti i fleksibilnosti enzima.
Koje su sličnosti između Phusiona i Taq polimeraze?
- I enzimi Phusion i Taq polimeraza su enzimi za polimerizaciju koji su u stanju da dodaju nukleotide na 3’ slobodni kraj lanca DNK.
- I Phusion i Taq polimeraze zahtijevaju sekvencu prajmera da započnu polimerizaciju.
- I Phusion i Taq polimeraze su toplotno stabilne.
- I Phusion i Taq polimeraze se koriste u PCR mehanizmima za amplifikaciju DNK.
- Kada se polimeraza dodaje u reakcionu smjesu, i Phusion i Taq polimeraze se dodaju posljednje kako bi se osigurala efikasnost enzima.
- I Phusion i Taq polimeraze su komercijalno sintetizirane za eksperimentalne svrhe molekularne biologije.
- I Phusion i Taq polimeraze zahtijevaju kofaktor da dovrše svoju funkciju.
Koja je razlika između Phusiona i Taq polimeraze?
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Phusion je DNK polimeraza izolirana iz Pyrococcus furiosus i uglavnom se koristi u eksperimentima kloniranja kako bi se povećala vjernost. | Taq DNK polimeraza je standardna DNK polimeraza koja se koristi u lančanoj reakciji polimeraze (PCR), a izolirana je iz termostabilne bakterije Thermus aquaticus. |
| Izvorni organizam | |
| Phusion se ekstrahuje iz ekstremofilne arheje – Pyrococcus furiosus. | Ova književna djela obuhvataju period od kolonizacije do perioda dekolonizacije. |
| Sposobnost lektoriranja | |
| 3’ – 5’ sposobnost provjere je prisutna u Phusionu. | 3’ – 5’ sposobnost čitanja dokaza je odsutna u Taq polimerazi. |
| Fidelity | |
| Visoka vjernost je tu uz Phusion. | Taq polimeraza pokazuje nisku vjernost. |
| Pojačanje | |
| Phusion je sposoban za amplifikaciju dugih DNK fragmenata. | Taq polimeraza je sposobna da pojača mnogo kraće fragmente DNK. |
| dUTP trovanje | |
| Phusion akcija je inhibirana akumulacijom kvote. | Taq polimerazu ne inhibira dUPT. |
Sažetak – Phusion vs Taq polimeraza
Phusion i Taq DNK polimeraza su dvije toplotno stabilne polimeraze koje se koriste u PCR tehnikama. Phusion je polimeraza izolirana iz ekstremofila, Pyrococcus furiosus, dok je Taq izoliran iz termostabilne bakterije Thermus aquaticus. Otkriće Taq DNK polimeraze dovodi do PCR izuma. Phusion ima mnogo prednosti u odnosu na Taq što je Phusion učinilo boljom opcijom u proizvodnji DNK visoke vjernosti. Međutim, Taq polimeraza se još uvijek koristi kao standardni enzim polimeraze u PCR-u. Ovo je razlika između Phusion i Taq polimeraze.
