Ključna razlika između ukupnog broja ćelija i broja živih ćelija je u tome što ukupni broj ćelija procenjuje sve ćelije uključujući žive i mrtve mikrobne ćelije u uzorku, dok broj živih ćelija procenjuje samo žive mikrobne ćelije u uzorku.
Prebrojavanje broja organizama unutar populacije smatra se neophodnim za većinu eksperimentalnog rada. Stoga pokušavamo analizirati broj mikroba u uzorku direktnim i indirektnim metodama. Direktna mjerenja uključuju metode koje direktno broje brojeve ćelija. Indirektna mjerenja uključuju mjerenje nekih parametara koji se mogu povezati s brojem ćelija kao što su gustina ćelije, suha težina itd. Neke metode kvantifikuju samo žive mikrobne ćelije u uzorku. Jedna takva metoda je brojanje živih ćelija. Direktno mikroskopsko prebrojavanje kvantifikuje sve ćelije u poznatoj zapremini medijuma/uzorka pomoću mikroskopa. Stoga broji i žive i mrtve ćelije. To je vrsta ukupnog broja ćelija.
Šta je ukupan broj ćelija?
Ukupni broj ćelija je metoda koja uključuje brojanje svih ćelija u poznatoj zapremini medijuma/uzorka pomoću mikroskopa i komore za brojanje (hemocitometar). Za razliku od broja živih ćelija, broje se i žive i mrtve ćelije. Prema tome, ovo je ukupan broj osim ako se tokom posmatranja ne nanese mrlja održivosti. U mikroskopiji, ćelije se posmatraju direktno pod mikroskopom i broje. Koristi suspenziju ćelija koja se sastoji od mikrobnih ćelija. Radi lakšeg brojanja i preciznih mjerenja, može se izvršiti razrjeđivanje uzorka. U vrlo visokim/niskim koncentracijama ćelija, dobijanje ukupnog broja ćelija pomoću mikroskopa je težak zadatak.
Slika 01: Komora za brojanje – hemocitometar
Komore za brojanje su jednostavne, jeftine i brze u ukupnom broju ćelija. Što je najvažnije, komore za brojanje su korisne za prebrojavanje i eukariota i prokariota. Brojimo ćelije u odabranim kvadratima poznate zapremine da kvantifikujemo ukupan broj ćelija.
Šta je Viable Cell Count?
Broj vitalnih ćelija je metoda brojanja živih mikrobnih ćelija u uzorku. Broji samo žive ćelije u uzorku. Broj vitalnih ploča, membranska filtracija i najvjerovatniji broj su nekoliko tehnika broja živih ćelija. Ovi pristupi su zasnovani na rastu. Metoda brojanja održivih ploča je moćna metoda koja se koristi u mnogim mikrobiološkim poljima, uključujući mikrobiologiju hrane i mliječnih proizvoda, medicinsku mikrobiologiju, mikrobiologiju okoliša, mikrobnu genetiku, razvoj medija za rast i biotehnologiju.
Najčešći način za brojanje živih bakterija je korištenje uzorka koji može formirati kolonije na agar podlozi. Postoje dva glavna načina za izvođenje brojanja ploča: tehnika raširenih ploča i tehnika zalijevanja. Poznata zapremina uzorka može se ili rasporediti po površini agar ploče ili umešati u agar. Ploča se zatim inkubira, a nastale kolonije se broje. Broj kolonija povezan je s brojem mikroorganizama unutar originalnog uzorka. Viable counts mjeri samo one ćelije koje su žive i rastu.
Slika 02: Broj ploča koje se mogu isplatiti
Najvjerovatniji broj (MPN) je alternativa metodama brojanja ploča za procjenu gustine populacije živih ćelija. Broji organizme koji rastu u tečnoj kulturi i stoga je pretežno bakteriološka tehnika. Posebno je koristan za niske koncentracije organizama, npr. mlijeko, pitka voda.
Tehnika membranske filtracije je prikladnija kada su mikrobi vrlo razrijeđeni kao u gradskom vodosnabdijevanju. To se radi jednostavnim propuštanjem poznate zapremine tečnosti kroz filter i inkubacijom na hranljivoj podlozi. Kolonije koje se razviju na filteru se broje i izračunavaju se bakterije po mililitru uzorka.
Koje su sličnosti između ukupnog broja ćelija i broja održivih ćelija?
- Ukupni broj ćelija i broj živih ćelija su dvije vrste mikrobnih tehnika koje kvantificiraju ćelije.
- One su uobičajene tehnike prebrojavanja u mikrobiološkim laboratorijama.
Koja je razlika između ukupnog broja ćelija i broja održivih ćelija?
Ukupni broj ćelija nabraja sve žive i mrtve mikrobne ćelije u uzorku. Nasuprot tome, broj živih ćelija nabraja samo žive ćelije u uzorku. Dakle, ovo je ključna razlika između ukupnog broja ćelija i broja živih ćelija. Ukupni broj ćelija ne zavisi od rasta kolonija na agar pločama, dok je broj živih ćelija tehnika zasnovana na rastu i zavisi od rasta kolonija mikroba na pločama sa agarom.
Info-grafika ispod rezimira razliku između ukupnog broja ćelija i broja živih ćelija.
Sažetak – Ukupan broj ćelija u odnosu na broj aktivnih ćelija
Ukupni broj ćelija nabraja i žive i mrtve mikrobne ćelije, dok broj živih ćelija nabraja samo žive ćelije. Dakle, ovo je ključna razlika između ukupnog broja ćelija i broja živih ćelija. Takođe, broj živih ćelija je tehnika zasnovana na rastu, za razliku od ukupnog broja ćelija. Štaviše, potrebna je inkubacija ploča dok se ne dobiju vidljive kolonije. Broj vitalnih ploča, MPN i membranska filtracija su samo nekoliko tehnika broja živih ćelija, dok su direktna mikroskopija i upotreba hemocitometra dvije tehnike ukupnog broja ćelija.
