Ključna razlika između BCA i Bradford testa je u tome što je BCA test dugotrajan i manje precizan, dok je Bradfordov test brz i precizan.
BCA i Bradfordov test su dvije metode analize za određivanje koncentracije proteina. Ova dva testa imaju različite principe analize i razlike u njihovoj preciznosti.
Šta je BCA test?
BCA test ili test bicinhoninske kiseline je biohemijski test koristan u određivanju ukupne koncentracije proteina u rastvoru. Ova metoda je takođe nazvana Smithov test po svom pronalazaču, Paulu K. Smithu. Ova analitička metoda pokazuje sličnosti sa Lowry proteinskim testom, Bradfordovim proteinskim testom ili biuretskim reagensom. Ukupnu koncentraciju proteina u datom uzorku možemo promatrati kroz promjenu boje otopine uzorka, koja prelazi iz zelene u ljubičastu. Ova promjena boje se događa proporcionalno sadržaju proteina. Nakon toga možemo koristiti kolorimetrijsku tehniku da analiziramo intenzitet boje i sadržaj proteina u uzorku.
BCA metoda procjene proteina
Kada se razmatra mehanizam BCA testa, tipična otopina BCA sadrži visoko alkalnu otopinu sa pH od skoro 11,25, a sastojci u ovom rastvoru uključuju bicinhoninsku kiselinu, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, natrijum tartarat i bakar(II) sulfat pentahidrat. Ovaj test prvenstveno zavisi od dve hemijske reakcije: redukcije bakra(II) u bakar(I) peptidnim vezama u proteinu i kelacije dva molekula bicinhoninske kiseline sa ionom bakra(I), što rezultira ljubičastim kompleksom koji može apsorbuju svetlost na talasnoj dužini od 562 nm. U prvoj reakciji, količina bakra(II) redukovanog peptidnim vezama proporcionalna je količini proteina u uzorku.
Šta je Bradfordov test?
Bradfordov test je spektroskopska analitička metoda korisna u mjerenju koncentracije proteina u otopini. Ovu metodu je razvila Marion M. Bradford 1976. godine i ona je relativno brza i tačna metoda.
Reakcija u boji proteina i Bradfordovog reagensa
Ovu metodu možemo koristiti da odredimo koncentraciju količine proteina u uzorku. Hemijska reakcija koja se odvija u uzorku tokom ovog testa isključivo zavisi od sastava aminokiselina proteina u uzorku.
Bradfordova metoda procjene proteina
Kada se uzme u obzir metoda ovog testa, to je kolorimetrijski proteinski test koji se zasniva na pomaku apsorbancije boje pod nazivom Coomassie Brilliant Blue G-250. Općenito, ova boja postoji u tri oblika kao anjonski (plavi) oblik, neutralni (zeleni) oblik i kationski (crveni) oblik. Stoga, u kiselim uvjetima, boja mijenja boju iz crvene u plavu. To je zbog vezivanja proteina sa bojom. Nasuprot tome, ako nema proteina koji bi se vezao sa bojom, promjena boje se ne pojavljuje, otopina dobiva crveno-smeđu boju. Ova boja je sposobna da formira jak, nekovalentni kompleks sa karboksilnom grupom proteina putem Van der Waalovih sila i elektrostatičkih privlačenja.
Koja je razlika između BCA i Bradford testa?
BCA i Bradfordov test su dvije metode analize za određivanje koncentracije proteina. Ova dva testa imaju različite principe analize i razlike u njihovoj tačnosti. Ključna razlika između BCA i Bradford testa je u tome što je BCA test dugotrajan i manje precizan, dok je Bradfordov test brz i precizan.
Sljedeća infografika sumira razlike između BCA i Bradford testa u obliku tabele.
Sažetak – BCA vs Bradfordov test
BCA test ili test bicinhoninske kiseline je biohemijski test koristan u određivanju ukupne koncentracije proteina u rastvoru. Bradfordov test je spektroskopska analitička metoda korisna u mjerenju koncentracije proteina u otopini. Ključna razlika između BCA i Bradfordove analize je u tome što je BCA dugotrajan i manje precizan, dok je Bradfordov test brz i precizan.
