Ključna razlika – CFU vs MPN
Jedinica za formiranje kolonija (CFU) i Najvjerovatniji broj (MPN) su dvije metode koje se koriste za popisivanje mikroorganizama u uzorcima. Oba parametra se koriste za otkrivanje kvaliteta vode i fekalnih indikatorskih bakterija u uzorcima vode. Jedinica za formiranje kolonija je mjera koja se koristi za nabrajanje broja živih bakterijskih ćelija ili ćelija gljivica u specifičnoj zapremini ili težini datog uzorka. Standardna jedinica za ovaj parametar je CFU/ml ili CFU/g. Najvjerovatniji broj je još jedna jedinica koja se koristi za mjerenje broja živih bakterijskih ćelija u tečnom uzorku. Ključna razlika između CFU i MPN je u tome što se CFU izračunava iz kolonija bakterija i gljivica koje rastu na čvrstoj agar ploči, dok se MPN izračunava iz održivih bakterija koje rastu u tekućem mediju.
Šta je CFU?
Jedinica za formiranje kolonija (CFU) je parametar koji mjeri broj živih bakterijskih ili gljivičnih ćelija u datom uzorku. Metoda koja broji jedinice koje formiraju kolonije naziva se standardnim brojem ploča. Vibilne kolonije koje se pojavljuju na pločama sa agarom izražene su kao CFU po 1 ml (jedinica za formiranje kolonije po mililitru) uzorka za tečnosti ili CFU po 1 g (jedinica za formiranje kolonije po jednom gramu) uzorka za čvrste materije.
Postoje dvije uobičajene metode koje se koriste za mjerenje CFU u uzorku. Radi se o metodi raširene ploče i metodi ploče za izlijevanje. Ove dvije metode su podržane tehnikom koja se zove serijsko razrjeđivanje. Serijski razblaženi uzorci omogućavaju dobijanje prebrojivog broja kolonija na površini agara. Poznata zapremina uzorka može se rasporediti na površinu agar ploče ili pomešati sa agarom i izliti na ploču. Ploča se zatim inkubira i broje se nastale kolonije. Broj kolonija se odnosi na broj mikroorganizama unutar originalnog uzorka. Ploče koje pokazuju previše kolonija ili premalo kolonija isključene su iz brojanja jer rezultati možda neće biti statistički precizni na tim pločama. Statistički, najbolji raspon je 30 – 300 kolonija na agar ploči. Stoga treba odabrati ispravne ploče za precizno nabrajanje. Serijsko razrjeđivanje se vrši za gornju funkciju.
Kada izbrojite broj održivih kolonija na pločama, CFU/ml se može izračunati korištenjem sljedeće jednačine.
CFU po ml originalnog uzorka=broj kolonija na ploči X faktor razrjeđenja
Faktor razblaženja=(1/ Razblaživanje ploče)
Na primjer, ako dobijete 149 kolonija na ploči razrjeđenja 10-4, tada se broj bakterija u 1 ml originalnog uzorka može izračunati na sljedeći način:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 ili 1490000
=1. 49 x 106
Slika 01: Jedinica za formiranje kolonija
Šta je MPN?
Najvjerovatniji broj je alternativna mjera za CFU/ml. MPN također procjenjuje održive ćelije u tečnom uzorku. Broji organizme koji rastu u tečnoj kulturi i pretežno je bakteriološka tehnika. Ova metoda je posebno korisna za uzorke koji sadrže niske koncentracije bakterijskih stanica; na primjer, mlijeko, voda za piće itd. MPN vrijednost se izražava za 100 ml zapremine. MPN se oslanja na statističku metodu zasnovanu na teoriji vjerovatnoće. Postoje statističke tabele dizajnirane za pronalaženje MPN vrijednosti po 100 ml uzorka. Ove tabele pokazuju rezultate na 95% granica pouzdanosti.
MPN vrijednost se izračunava nakon izvođenja tehnike koja se zove metoda fermentacije u više cijevi. Tri seta epruveta koje sadrže odgovarajući medij za kulturu inokuliraju se sa tri različite zapremine uzorka kao što su 10 ml, 1 ml i 0.1 ml i inkubirano za rast. Nakon perioda inkubacije, epruvete se boduju + (pozitivno) ili – (negativno) za prisustvo ili odsustvo rasta. Obrazac pozitivnih i negativnih rezultata se zatim upoređuje sa MPN tablicom statističkih vjerovatnoća kako bi se procijenio broj mikroorganizama. Zatim se daje MPN vrijednost za 100 ml uzorka. MPN se široko koristi za otkrivanje koliformnih bakterija prisutnih u uzorcima vode.
Slika 02: MPN tabela
Koja je razlika između CFU i MPN?
CFU vs MPN |
|
| CFU je mjera koja se koristi za izražavanje broja živih kolonija bakterija ili gljivica u datom uzorku. | MPN je alternativna mjera za CFU i mjeri broj živih bakterijskih ćelija u tečnom uzorku. |
| Jedinica | |
| CFU/ml ili CFU/g | MPN/100 ml |
| Obračun | |
| CFU se izračunava prebrojavanjem broja kolonija uzgojenih na agar pločama. | MPN se izračunava poređenjem pozitivnih i negativnih uzoraka cijevi sa MPN statističkom tablicom. |
| Tehnika serijskog razrjeđivanja | |
| Serijsko razrjeđivanje se izvodi prije stavljanja uzoraka na agar ploče. | Serijsko razrjeđivanje se normalno ne izvodi kada se izračunava MPN |
| Metode | |
| Metoda raširenih ploča i metoda nalivne ploče su dvije vrste metoda koje se izvode za dobivanje CFU. | Vermentacija u više cijevi je metoda kojom se dobija MPN vrijednost. |
Sažetak – CFU vs MPN
Mjerenje mikrobnog rasta je potrebno iz više razloga. U pogonima za preradu hrane potrebno je mjeriti nivo i vrstu mikroorganizama u hrani. U prehrambenoj industriji i medicini potrebno je osigurati efikasnu primjenu sterilizacijskih tretmana. U postrojenjima za prečišćavanje otpadnih voda potrebno je rutinski mjeriti broj mikroba. Prilikom optimizacije postupka u molekularnoj biologiji potrebno je izmjeriti broj kolonija na pločama. Stoga su dostupne različite metode popisivanja i mjerenja rasta. CFU i MPN su dvije takve metode koje se široko primjenjuju u različitim oblastima. CFU je mjera za broj održivih kolonija bakterija i gljivica prisutnih u datom uzorku. Izračunava se koristeći standardnu metodu brojanja ploča ili metodu broja živih ploča. MPN je još jedna mjera koja izražava broj bakterijskih ćelija prisutnih u datoj zapremini tečnog uzorka. Izračunava se korištenjem metode fermentacije u više cijevi i MPN tablice. Ovo je razlika između CFU i MPN.
Preuzmite PDF verziju CFU vs MPN
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za vanmrežne svrhe prema napomenama o citatima. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje Razlika između CFU i MPN.
