Ključna razlika između hromatofokusiranja i izoelektričnog fokusiranja je u tome što je hromatofokusiranje vrsta metode kolonske hromatografije koja koristi smole za izmjenu jona dok je izoelektrično fokusiranje vrsta tehnike elektroforeze koja koristi imobilizirane pH gradijent gelove.
Hromatofokusiranje i izoelektrično fokusiranje su dvije tehnike koje razdvajaju proteine prema njihovim izoelektričnim tačkama. I kromatofokusiranje i izoelektrično fokusiranje imaju veliku moć razlučivanja. Kromatofokusiranje je metoda kolonske hromatografije visoke rezolucije, dok je izoelektrično fokusiranje metoda elektroforetskog odvajanja. Štaviše, kromatofokusiranje ne koristi električno polje dok izoelektrično fokusiranje zahtijeva električno polje.
Šta je hromatofokusiranje?
Hromatofokusiranje je vrsta hromatografije visoke elucije koja razdvaja proteine prema razlikama u njihovoj izoelektričnoj tački. Koristi kolonu smole za izmjenjivanje jona i interno razvijen pH gradijent. Za razliku od izoelektričnog fokusiranja, kromatofokusiranje ne uključuje električno polje. Kromatofokusiranje je moćna tehnika pročišćavanja koja može razlučiti vrlo slične molekule čak i samo za 0,02 pH jedinice. Stoga je kromatofokusiranje najprikladnije kao završni korak poliranja kada je potrebna visoka rezolucija za odvajanje vrlo sličnih komponenti.
U hromatofokusiranju, uzorak se nanosi na kolonu miješanjem sa početnim puferom. Proteini koji su na pH iznad svoje izoelektrične tačke negativno su nabijeni i ostaju blizu vrha kolone, dok drugi proteini koji su na pH ispod svoje izoelektrične tačke migriraju niz kolonu. Protein s najvišom izoelektričnom tačkom se prvi eluira dok se protein s najnižom izoelektričnom tačkom eluira posljednji iz kolone. Na ovu tehniku utiče nekoliko faktora kao što su taloženje proteina i linearnost pH gradijenta.
Šta je izoelektrično fokusiranje?
Izoelektrično fokusiranje je tehnika koja razdvaja različite molekule na osnovu njihove izoelektrične tačke. Poznato je i kao elektrofokusiranje. Ova tehnika se često koristi za odvajanje proteina u gelu. U izoelektričnom fokusiranju, uzorak se dodaje u imobilizirani pH gradijent (IPG) gelove. IPG gel je matrica akrilamidnog gela kopolimerizovana sa pH gradijentom. Proteini migriraju prema katodi dok ne pronađu pH područje svojih izoelektričnih tačaka. Kada protein dostigne pH koji nema neto naboj, migracija prestaje i daje stacionarnu traku. Slično, svaki protein daje traku u tački u pH gradijentu koja odgovara njegovoj izoelektričnoj tački.
Slika 01: Izoelektrično fokusiranje
Izoelektrično fokusiranje je prvi korak dvodimenzionalne gel elektroforeze. U toj tehnici, proteini se prvo razdvajaju prema njihovim izoelektričnim tačkama izoelektričnim fokusiranjem, a zatim se odvajaju prema njihovoj molekularnoj težini putem SDS-PAGE.
Koje su sličnosti između hromatofokusiranja i izoelektričnog fokusiranja?
- Hromatofokusiranje i izoelektrično fokusiranje su dvije metode visoke rezolucije.
- Oba se zasnivaju na izoelektričnoj tački proteina.
- Ove tehnike koriste pH gradijent.
- Obje procedure su informativne za karakterizaciju varijanti humanog hemoglobina.
- Oni mogu razlučiti molekule kod kojih se pI vrijednosti razlikuju za samo 0,02 pH jedinice.
Koja je razlika između hromatofokusiranja i izoelektričnog fokusiranja?
Chromatofocusing je tehnika kolonske hromatografije visoke rezolucije koja razdvaja proteine prema njihovoj izoelektričnoj tački. Nasuprot tome, izoelektrično fokusiranje je elektroforetska tehnika koja razdvaja proteine prema njihovoj izoelektričnoj tački primjenom električnog polja duž pH gradijenta formiranog u kapilari. Dakle, ovo je ključna razlika između hromatofokusiranja i izoelektričnog fokusiranja.
Još jedna razlika između hromatofokusiranja i izoelektričnog fokusiranja je ta što hromatofokusiranje ne uključuje električno polje dok izoelektrično fokusiranje treba električno polje.
Sažetak – kromatofokusiranje vs izoelektrično fokusiranje
Hromatofokusiranje i izoelektrično fokusiranje su dvije slične tehnike koje imaju visoku sposobnost razlučivanja molekula, posebno vrlo sličnih molekula. Kromatofokusiranje je tehnika kolonske hromatografije visoke rezolucije dok je izoelektrično fokusiranje metoda elektroforeze. Kromatofokusiranje ne uključuje električno polje, za razliku od izoelektričnog fokusiranja. Dakle, ovo rezimira razliku između hromatofokusiranja i izoelektričnog fokusiranja.
