Ključna razlika između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije je u tome što je imunoprecipitacija tehnika koja precipitira protein iz otopine korištenjem specifičnog antitijela, dok je koimunoprecipitacija tehnika koja precipitira intaktne proteinske komplekse iz otopine korištenjem specifičnog antitijela.
Interakcija antigen-antitelo je specifična hemijska interakcija između antitela koje proizvode B ćelije i antigena (proteina) tokom imunološke reakcije. Normalno, rastvorljivi antigeni se kombinuju sa rastvorljivim antitijelima u prisustvu elektrolita na topivoj temperaturi i pH kako bi se napravio nerastvorljivi vidljivi kompleks. To se zove reakcija precipitacije. Stoga su imunoprecipitacija i koimunoprecipitacija dvije vrste precipitacijskih reakcija koje se rutinski koriste u laboratorijama za identifikaciju proteina kao što su antigeni.
Šta je imunoprecipitacija?
Imunoprecipitacija je tehnika precipitacije proteina iz otopine korištenjem specifičnog antitijela. Ponekad je ova tehnika poznata i kao individualna proteinska imunoprecipitacija. Imunoprecipitacija koristi antitijelo za izolaciju odabranog proteina od interesa iz ćelijskog lizata. Antitijelo pročišćava svoj specifični ciljni protein ili antigen iz mješavine. Antitijelo se veže za protein, a kompleks antitijelo-antigen se izvlači iz uzorka. U eksperimentalnoj postavci, kompleks antigen-antitijelo se izvlači pomoću agaroze ili magnetnih kuglica vezanih za protein A/G. Kasnije se perle isperu, a protein od interesa se eluira. Pročišćeni protein ili antigen dobijen imunoprecipitacijom se provjerava različitim tehnikama kao što su enzimski imunosorbentni test (ELISA) i western blot (WB).
Slika 01: Imunoprecipitacija
Dalje, izolovani proteini ili antigeni mogu se kvantifikovati i identifikovati putem masene spektrometrije korišćenjem obrazaca enzimske digestije zasnovane na primarnoj sekvenci. Postoje određena razmatranja prije početka eksperimenta imunoprecipitacije: izbor formata metode, vezivanje proteina i kuglica, odabir pravog primarnog antitijela i izotipa i negativna kontrola.
Šta je koimunoprecipitacija?
Koimunoprecipitacija je tehnika precipitacije intaktnih proteinskih kompleksa iz otopine korištenjem specifičnog antitijela. Koimunoprecipitacija općenito funkcionira odabirom specifičnog antitijela koje cilja na poznati protein (antigen) za koji se vjeruje da je član većeg kompleksa proteina. Ciljanjem poznatog člana sa specifičnim antitijelom, moguće je izvući cijeli proteinski kompleks iz otopine. To omogućava identifikaciju nepoznatih članova kompleksa. Koncept izvlačenja proteinskih kompleksa iz rastvora se ponekad naziva mehanizam „povlačenje nadole“.
Slika 02: B Coimmunoprecipitation
Koimunoprecipitacija je moćna tehnika koja se koristi za analizu interakcija protein-protein. Glavna svrha koimunoprecipitacije je identifikacija partnera u interakciji kao što su ligandi, kofaktori ili signalni molekuli za protein od interesa. Štaviše, koimunoprecipitacija je efikasna tehnika koja se koristi za odvajanje proteina iz seruma, ćelijskog lizata, homogenizovanog tkiva ili kondicioniranih medija.
Koje su sličnosti između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije?
- Imunoprecipitacija i koimunoprecipitacija su dvije vrste tehnika zasnovanih na precipitacijskim reakcijama.
- Obje tehnike se mogu koristiti za identifikaciju ciljnog antigena putem specifičnog antitela.
- Obje tehnike jako zavise od interakcije antigen-antitijelo.
- Rutinski se koriste u kliničkim laboratorijama.
Koja je razlika između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije?
Imunoprecipitacija je tehnika koja precipitira protein iz rastvora upotrebom specifičnog antitela, dok je koimunoprecipitacija tehnika koja istaloži intaktne proteinske komplekse iz rastvora korišćenjem specifičnog antitela. Dakle, ovo je ključna razlika između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije. Nadalje, imunoprecipitacija se češće koristi u laboratorijama, dok se koimunoprecipitacija ne koristi uobičajeno u laboratorijama.
Infografika ispod predstavlja razlike između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije u tabelarnom obliku za usporedbu.
Sažetak – Immunoprecipitation vs Coimmunoprecipitation
Imunoprecipitacija i koimunoprecipitacija su dvije vrste tehnika zasnovanih na precipitacijskim reakcijama koje zavise od interakcije antigen-antitijelo. Tehnika imunoprecipitacije precipitira protein iz otopine korištenjem specifičnog antitijela, dok tehnika koimunoprecipitacije precipitira intaktne proteinske komplekse iz otopine pomoću specifičnog antitijela. Dakle, ovo rezimira razliku između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije.
