Ključna razlika između mikronukleusnog i kometskog eseja je ta što je mikronukleusni test važan za provjeru hromozomskog oštećenja kao posljedica izloženosti mutagenima, dok je komet test važan za otkrivanje primarnog oštećenja DNK u pojedinačnim stanicama.
Testovi genotoksičnosti pomažu u procjeni mogućnosti mutacija i hromozomskih abnormalnosti. Genotoksini uključuju hemijske supstance i zračenje. Karcinogeni, mutageni i teratogeni su glavne kategorije genotoksina. Oni uzrokuju različita oštećenja kao što su točkaste mutacije, delecije, jedno- i dvolančane lomove, hromozomske aberacije, formiranje mikronukleusa, popravak DNK i interakcije ćelijskog ciklusa. Takva stanja mogu dovesti do širokog spektra bolesti, a testovi genotoksičnosti sprječavaju potencijalnu štetu od ovih stanja. Test mikronukleusa i analiza kometa su dvije tehnike u testovima genotoksičnosti.
Šta je mikronukleusni test?
Mikronukleusni test je test za procjenu oštećenja hromozoma kao posljedica izloženosti mutagenima. Važan je u skriningu hemikalija koje uzrokuju stvaranje vretena i mikronukleusa. Mikronukleusni test daje informacije o stabilnosti hemikalija kada ometaju strukturu i funkciju hromozoma. Mnogi karcinogeni su pozitivni u mikronukleusnim testovima. Proces analize uključuje hemijski tretman i mjerenje frekvencije mikronukleiranih ćelija. Ako dođe do abnormalnog povećanja broja mikronukleusnih ćelija, zaključuje se da hemikalija izaziva hromozomsko oštećenje.
Test mikronukleusa se obično izvodi na ćelijama koje se aktivno dijele. Stoga su eritrociti i matične stanice koštane srži proizvedene diobom stanica idealni kandidati za takve testove. Oni doživljavaju konstantan i brz obrt. Pošto eritrociti nemaju prave jezgre, mikronukleirane ćelije su vidljivije na kraju testa.
Slika 01: Posmatranje mikronukleusnim testom
Mikronukleus testovi su ekonomični, brži, praktičniji i zahtijevaju manje vještina za izvođenje. Oni brzo odražavaju hromozomske aberacije na pouzdan način i izuzetno su korisni za brzu procjenu hromozomskih oštećenja. Poseban i svestran tip mikronukleusnog testa je test mikronukleusnog citoma bloka citokineze (CBMNcyt). To je poželjan test za mjerenje hromozomskih oštećenja i nestabilnosti u ćelijama. Međutim, glavni problem upotrebe mikronukleusnog eseja je to što nije u stanju da odredi različite tipove hromozomskih aberacija, a test utiče na mitotičku brzinu i proporciju ćelijske smrti, što dovodi do promene rezultata.
Šta je analiza kometa?
Comet test, koji je također poznat kao test elektroforeze u jednom gelu, je jednostavna i osjetljiva tehnika za otkrivanje oštećenja DNK. On mjeri prekide DNK u eukariotskim ćelijama i standardna je tehnika za biomonitoring i testiranje genotoksičnosti.
Kometski test je uključen u inkapsulaciju ćelija u suspenzije agaroze niske tačke topljenja, lizu ćelija u neutralnim ili alkalnim uslovima i elektroforezu suspendovanih liziranih ćelija. Tokom procesa inkapsulacije, ćelije su suspendovane u rastopljenoj agarozi niske tačke topljenja, a agaroza formira matriks ugljenih hidratnih vlakana da ih učvrsti na mestu. Agaroza je osmotski neutralna; stoga omogućava rastvorima da prodru kroz gel i utiču na ćelije bez njihovog ometanja i pomeranja. Otopina za lizu je visoko koncentrirana vodena otopina soli i deterdženta. Ova so remeti proteine i obrasce vezivanja unutar ćelije, dok remeti sadržaj RNK u ćeliji. Ćelije uništavaju, a svi proteini, RNA, citoplazmatski i nukleoplazmatski sastojci, poremete se i difundiraju u matriks agaroze, ostavljajući DNK.
Slika 02: Analiza kometa
Otvor za elektroforezu je alkalna otopina u kojoj dvostruka spirala DNK denaturira, a nukleoid postaje jednolančan. Tokom ovog procesa primjenjuje se električno polje za analizu slika. Analiza slike mjeri ukupni intenzitet fluorescencije za DNK i nukleoid i upoređuje ih. Celokupna struktura podseća na kometu sa kružnom glavom koja odgovara preostaloj neoštećenoj DNK i repom za oštećenu DNK. Što je rep svetliji i duži zbog jačih signala, to je veći nivo oštećenja.
Koje su sličnosti između analize mikronukleusa i kometa?
- Mikronukleus i test kometa su ekonomični, brži, praktičniji i zahtevaju manje veština.
- Uglavnom se izvode na DNK.
- Oba testa pomažu u procjeni mutacija i hromozomskih abnormalnosti.
- Štaviše, obje tehnike koriste hemikalije za izvođenje procedure.
Koja je razlika između mikronukleusnog i kometskog testa?
Test mikronukleusa je važan u provjeri hromozomskih oštećenja kao posljedica izloženosti mutagenima, dok je komet test važan u otkrivanju primarnog oštećenja DNK u pojedinačnim stanicama. Dakle, ovo je ključna razlika između analize mikronukleusa i kometa. Takođe, mikronukleusni test je dobro uspostavljen za otkrivanje klastogenosti i aneugenosti. Test kometa se koristi kao test genotoksičnosti za otkrivanje primarnog oštećenja DNK u ćelijama. Štaviše, mikronukleusni test daje informacije o stabilnosti hemikalija, dok je komet test elektroforeza u gelu jedne ćelije.
Infografika ispod predstavlja razlike između mikronukleusnog i kometnog testa u tabelarnom obliku radi usporedbe.
Sažetak – Analiza mikronukleusa vs kometa
Testovi genotoksičnosti pomažu u procjeni mogućnosti mutacija i hromozomskih abnormalnosti. Test mikronukleusa i analiza kometa su dvije tehnike u testovima genotoksičnosti. Mikronukleus test procjenjuje hromozomsko oštećenje kao posljedicu izlaganja mutagenima. Comet test je jednostavna i osjetljiva tehnika za otkrivanje oštećenja DNK. Dakle, ovo je ključna razlika između analize mikronukleusa i kometa. Mikronukleusni test je važan u skriningu na hemikalije koje uzrokuju stvaranje vretena i mikronukleusa. Comet test je uključen u inkapsulaciju ćelija u suspenzije agaroze niske tačke topljenja, lizu ćelija u neutralnim ili alkalnim uslovima i elektroforezu suspendovanih liziranih ćelija.
