Ključna razlika između gel filtracije i afinitetne hromatografije je ta što gel filtracijska hromatografija zavisi od razlika u molekularnoj težini ili veličini uzorka analita, dok afinitetna hromatografija zavisi od afiniteta analita prema imobilizovanom ligandu.
Izraz hromatografija u analitičkoj hemiji odnosi se na proces razdvajanja komponenti u smeši korišćenjem različitih tehnika. Kromatografija je skupni naziv koji predstavlja različit broj različitih metoda za razdvajanje.
Šta je gel filtracijska hromatografija?
Gel filtraciona hromatografija je analitička tehnika u kojoj razdvajanje komponenti zavisi od razlike u molekularnoj težini ili veličini. Ova tehnika je također poznata kao hromatografija s isključenjem veličine ili kromatografija na molekularnom situ. Tehnika separacije u ovom procesu ovisi o različitoj sposobnosti molekula u uzorku da uđu u pore medija za gel-filtraciju.
U tehnici gel filtracije, stacionarna faza sadrži kuglice hidratiziranog materijala nalik spužvi s porama molekularnih dimenzija koje sadrže uski raspon veličina. Ako propuštamo vodenu otopinu koja se sastoji od molekula različitih veličina kroz kolonu koja sadrži ova "molekularna sita", molekuli koji su veći od pora medija za filtraciju brzo se kreću kroz kolonu. Nasuprot tome, manji molekuli ulaze u pore gela i teže da se polako kreću kroz kolonu. Molekuli eluiraju iz kolone prema opadajućoj veličini molekula. Ovdje je granica isključenja gela molekulska masa najmanjih molekula koji ne mogu prodrijeti u pore datog gela.
Postoje različite vrste tehnika gel filtracije, kao što su indirektna metoda gel filtracije, stabilna gel filtracija, dijaliza gel perlicama, itd. Indirektna gel filtracijska hromatografija je korisna u određivanju slobodnih hormona štitnjače. Stacionarna gel filtracijska kromatografija je indirektna tehnika korisna uglavnom za mjerenje slobodnih steroida kao što su kortizol, testosteron, itd. Dijaliza gel kuglicama, s druge strane, je modifikacija stabilne gel filtracije koja je relativno jednostavnija.
Šta je afinitetna hromatografija?
Afinitetna kromatografija je analitička tehnika i metoda razdvajanja koja ovisi o specifičnoj interakciji vezivanja između imobiliziranog liganda i njegovog partnera za vezivanje. Neki primjeri uključuju vezivanje antitijelo-antigen, vezivanje enzima-supstrata i vezivanje enzima-inhibitora. Stoga ova tehnika ima mnoge važne primjene u pročišćavanju nukleinskih kiselina, pročišćavanju proteina iz ćelijskih ekstrakata i prečišćavanju krvi.
U ovoj tehnici, najvažnije svojstvo je imobilizacija liganda. Za to možemo koristiti razne materijale kao što su akrilati i silika gel. Važno je spriječiti sterične interferencije ciljnog molekula na ligand. Štaviše, inhibitor je vezan za čvrstu fazu. Ovaj inhibitor nazivamo odstojnikom. Klasično, odstojnik se sastoji od ugljikovodičnog lanca.
Stacionarna faza afinitetne hromatografije sadrži jezgro, razmaknicu i ligand. Ponekad ima i metalni jon koji je povezan sa ligandom. Najpoželjnija čvrsta faza za stacionarnu fazu u ovoj tehnici je agarozni gel jer se lako dozira za punjenje i pakovanje kolone sa slojevima smole bilo koje veličine, i dovoljno je velika da biomolekule slobodno teku u i kroz kuglice. Ligandi se mogu kovalentno vezati za polimer zrna na različite načine. Najčešći spojevi za razmak su cijanogen bromid, epoksid, epoksid sa C6 kiselinom i diamin. S druge strane, ligand koji možemo koristiti razlikuje se u zavisnosti od cilja, npr. antitijelo-antigen, ioni željeza ili aluminija-fosfoproteini, avidin-biotin, glutation-GST, helator-His-označeni proteini, itd.
Koja je razlika između gel filtracije i afinitetne hromatografije?
Hromatografija je važna analitička tehnika. Gel filtraciona hromatografija i afinitetna hromatografija su dve važne varijacije hromatografije. Ključna razlika između gel filtracije i afinitetne hromatografije je u tome što gel filtraciona hromatografija zavisi od razlika u molekularnoj težini ili veličini uzorka analita, dok afinitetna hromatografija zavisi od afiniteta analita prema imobilizovanom ligandu.
Sažetak – gel filtracija naspram afinitetne hromatografije
Postoje različite vrste hromatografskih tehnika prema njihovoj primjeni i prirodi uzorka analita. Gel filtracija i afinitetna hromatografija su dvije takve vrste tehnika. Ključna razlika između gel filtracije i afinitetne kromatografije je ta što gel filtracijska kromatografija ovisi o razlici u molekularnoj težini ili veličini uzorka analita, dok afinitetna kromatografija ovisi o afinitetu analita prema imobiliziranom ligandu.
