Ključna razlika – nitroceluloza naspram najlonske membrane
Blotting je važna tehnika za detekciju specifičnih sekvenci DNK, RNK i proteina iz njihovih mješavina u molekularnoj biologiji. Radi se pomoću membrane koja se zove blot. Postoje različite tehnike upijanja kao što su sjeverni, južni i zapadni bloting. Odabir odgovarajuće membrane za proces upijanja treba pažljivo obaviti kako bi se spriječilo nespecifično vezivanje i pogrešna detekcija. Nitroceluloza, najlon i PVDF su membrane koje se obično koriste u tehnikama upijanja. Imaju različite karakteristike. Ključna razlika između nitroceluloze i najlonske membrane je u tome što nitrocelulozne membrane imaju visok potencijal imobilizacije proteina, dok najlonske membrane imaju visok potencijal imobilizacije nukleinske kiseline. Međutim, obje vrste membrana se često koriste u tehnikama upijanja.
Šta je nitrocelulozna membrana?
Nitrocelulozna membrana je često korišteni membranski filter u tehnikama blotinga nukleinskih kiselina i proteina. Ima visok potencijal vezivanja za proteine. Stoga se nitrocelulozne membrane široko koriste u tehnici Western blottinga. Nitrocelulozne membrane su kompatibilne sa svim tehnikama hibridizacije i pokazuju superiorne kapacitete vezivanja bez smetnji. Nitrocelulozne membrane su po prirodi hidrofilne. Ostvaruju hidrofilnu interakciju s molekulima i efikasno ih imobiliziraju na membranu. Komercijalne nitrocelulozne membrane dostupne su u dvije veličine pora: 0,45 i 0,2 µm.
Slika 01: Nitrocelulozna membrana korištena u western blottingu
Šta je najlonska membrana?
Najlonska membrana je još jedna vrsta komercijalne membrane koja se koristi u tehnikama upijanja. Alternativno se koristi sa nitroceluloznim membranama za Southern i Northern blot. Najlonske membrane su idealne za Southern blot od nitroceluloze zbog njihovog visokog afiniteta za vezivanje sa DNK. Zbog nekoliko jedinstvenih karakteristika najlonskih membrana, istraživači obično koriste najlonske membrane za Southern i Northern blot umjesto preko nitrocelulozne membrane. Najlonske membrane se također preporučuju za skidanje i ponovno ispitivanje, za razliku od nitroceluloze.
Slika 02: Najlonska membrana korištena za Southern blotting
Koja je razlika između nitroceluloze i najlonske membrane?
Nitroceluloza protiv najlonske membrane |
|
| Nitrocelulozne membrane su lomljive. | Najlonske membrane su manje lomljive. |
| Rukovanje | |
| Teško ih je rukovati. | Lako se rukuje. |
| Reprobing | |
| Nepodržane nitrocelulozne membrane je teško ponovo ispitati. | Ponovno sondiranje je jednostavno sa najlonskim membranama. |
| Kompatibilnost s različitim uvjetima skladištenja | |
| Nitrocelulozne membrane imaju manju snagu da izdrže različite uslove skladištenja. | Najlonske membrane snažnije reaguju na različite uslove skladištenja. |
| Koristi | |
| Potrebno je prethodno vlaženje. | Nije potrebno predkvašenje za najlonske membrane. |
| Hidrofilna priroda | |
| Nitrocelulozne membrane su hidrofilne po prirodi, ali su manje hidrofilne od najlonskih membrana. | Izuzetno su hidrofilne prirode. |
| Potencijal imobilizacije | |
| Nitrocelulozne membrane imaju manji afinitet za nukleinske kiseline. Ali ima visok afinitet prema proteinima. | Najlonske membrane imaju visok potencijal vezivanja za nukleinske kiseline nego nitrocelulozne membrane. |
Sažetak – Nitroceluloza protiv najlonske membrane
Nitrocelulozne i najlonske membrane su posebne ploče koje se koriste u tehnici upijanja za reprodukciju šare trake na gelu. Omogućuju mogućnost detekcije specifične sekvence ili proteina iz mješavina imobilizacijom na membrani. Kada se molekuli imobiliziraju na membrani, može se koristiti kao supstrat za analizu hibridizacije sa označenim sondama. Nitrocelulozna membrana se obično koristi za detekciju proteina u western blotting tehnici zbog visokog afiniteta vezivanja za proteine. Najlonske membrane se često koriste za Southern i Northern blot. Ovo je razlika između nitrocelulozne i najlonske membrane.
