Ključna razlika – protočna citometrija naspram FACS
U kontekstu ćelijske teorije, ćelije su osnovna strukturna i funkcionalna jedinica svih živih organizama. Sortiranje ćelija je metodologija koja se koristi za razdvajanje različitih ćelija prema fiziološkim i morfološkim karakteristikama. Mogu biti intracelularnih ili ekstracelularnih karakteristika. Interakcija DNK, RNK i proteina se smatra intracelularnim interaktivnim svojstvima, dok se oblik, veličina i različiti površinski proteini smatraju ekstracelularnim svojstvima. U savremenoj nauci, metodologije sortiranja ćelija dovele su do pomoći različitim istraživanjima u biološkim studijama, kao i u uspostavljanju novih principa kroz istraživanje medicine. Sortiranje ćelija se vrši na različitim metodologijama koje uključuju primitivne sa manje opreme i napredne tehnološke metodologije uz upotrebu sofisticiranih mašina. Protočna citometrija, fluorescentno aktivirano sortiranje ćelija (FACS), selekcija magnetnih ćelija i sortiranje pojedinačnih ćelija su glavne metodologije koje se koriste. Protočna citometrija i FACS su razvijeni da diferenciraju ćelije prema njihovim optičkim svojstvima. FACS je specijalizovana vrsta protočne citometrije. Protočna citometrija je metodologija koja se koristi prilikom analize heterogene populacije ćelija prema različitim molekulima površine ćelije, veličini i zapremini koja omogućava istraživanje pojedinačnih ćelija. FACS je proces kojim se mješavina uzoraka ćelija sortira prema njihovim karakteristikama rasipanja svjetlosti i fluorescencije u dva ili više kontejnera. Ovo je ključna razlika između protočne citometrije i FACS-a.
Šta je protočna citometrija?
Protočna citometrija je metoda koja se koristi za ispitivanje i određivanje ekspresije intracelularnih molekula i površine ćelije i za definisanje i karakterizaciju različitih tipova ćelija. Takođe se koristi za određivanje zapremine ćelije i veličine ćelije i za procenu čistoće izolovanih subpopulacija. Ovo omogućava procjenu više parametara pojedinačnih ćelija otprilike u isto vrijeme. Protočna citometrija se koristi za mjerenje intenziteta fluorescencije koja se proizvodi zbog fluorescentno obilježenih antitijela koja pomažu u identifikaciji proteina ili liganda koji se vezuju za povezane stanice.
Slika 01: Protočna citometrija
Generalno, protočna citometrija uključuje uglavnom tri podsistema. To su fluidika, elektronika i optika. U protočnoj citometriji dostupno je pet glavnih komponenti koje se koriste u sortiranju ćelija. To su protočna ćelija (tok tečnosti koji se koristi za transport i poravnavanje ćelija za proces optičkog sensinga), sistem merenja (može biti različitih sistema uključujući živine i ksenonske lampe, vodeno hlađene velike snage ili zrakom hlađeni laseri male snage ili diodni laseri), ADC; Sistem analogno-digitalnog pretvarača, sistem pojačanja i kompjuter za analizu. Akvizicija je proces kojim se podaci prikupljaju iz uzoraka pomoću protočnog citometra. Ovaj proces je posredovan kompjuterom koji je povezan sa protočnim citometrom. Softver prisutan u računaru analizira informacije koje se unose u računar iz protočnog citometra. Softver takođe ima mogućnost podešavanja parametara eksperimenta koji kontroliše protočni citometar.
Šta je FACS?
U kontekstu protočne citometrije, fluorescentno aktivirano sortiranje ćelija (FACS) je metoda koja se koristi za razlikovanje i sortiranje uzorka mješavine bioloških ćelija. Ćelije su odvojene od dva ili više kontejnera. Metoda sortiranja zasniva se na fizičkim karakteristikama ćelije koja uključuje raspršivanje svjetlosti i karakteristike fluorescencije ćelije. Ovo je važna naučna tehnika koja se može koristiti za dobijanje pouzdanih kvantitativnih i kvalitativnih rezultata fluorescentnih signala koji se emituju iz svake ćelije. Tokom FACS, u početku, prethodno dobijena mešavina ćelija; suspenzija je usmjerena u središte uskog toka tekućine koji brzo teče. Protok tečnosti je dizajniran da odvoji ćelije u suspenziji na osnovu prečnika svake ćelije. Mehanizam vibracije se primjenjuje na mlaz suspenzije što rezultira stvaranjem pojedinačnih kapljica.
Slika 02: FACS
Sistem je kalibrisan kako bi se stvorila jedna kapljica sa jednom ćelijom. Neposredno prije formiranja kapljica, suspenzija protoka se kreće duž aparata za mjerenje fluorescencije koji detektuje karakteristike fluorescencije svake ćelije. Na mjestu formiranja kapljica postavlja se električni prsten za punjenje koji se inducira na prstenu prije mjerenja intenziteta fluorescencije. Jednom kada se kapljice formiraju iz struje suspenzije, naelektrisanje je zarobljeno unutar kapljica koje zatim ulazi u elektrostatički sistem otklona. Prema punjenju, sistem preusmjerava kapljice u različite posude. Način primjene punjenja varira u zavisnosti od različitih sistema koji se koriste u FACS-u. Oprema koja se koristi u FACS-u je poznata kao fluorescentno aktivirani sorter ćelija.
Koja je sličnost između protočne citometrije i FACS-a?
Protočna citometrija i FACS su razvijeni da diferenciraju ćelije prema njihovim optičkim svojstvima
Koja je razlika između protočne citometrije i FACS-a?
protočna citometrija vs FACS |
|
| Protočna citometrija je metodologija koja se koristi tokom analize heterogene populacije ćelija prema različitim molekulima površine ćelije, veličini i zapremini koja omogućava istraživanje pojedinačnih ćelija. | FACS je proces kojim se uzorak mješavine ćelija sortira prema njihovim karakteristikama rasipanja svjetlosti i fluorescencije u dva ili više kontejnera. |
Sažetak – protočna citometrija vs FACS
Ćelija je osnovna strukturna i funkcionalna jedinica svih živih organizama. Sortiranje ćelija je proces kojim se ćelije izoluju i diferenciraju u različite kategorije na osnovu njihovih intracelularnih i ekstracelularnih svojstava. Protočna citometrija i FACS su dvije važne metodologije u sortiranju ćelija. Oba procesa su razvijena da diferenciraju ćelije prema njihovim optičkim svojstvima. Protočna citometrija je metodologija koja se koristi prilikom analize heterogene populacije ćelija prema različitim molekulima površine ćelije, veličini i zapremini koja omogućava istraživanje pojedinačnih ćelija. FACS je proces kojim se mješavina uzoraka ćelija sortira prema njihovim karakteristikama rasipanja svjetlosti i fluorescencije u dva ili više kontejnera. Ovo je razlika između protočne citometrije i FACS-a.
Preuzmite PDF verziju protočne citometrije vs FACS
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za vanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje Razlika između protočne citometrije i FACS
