Ključna razlika između BL21 i DH5 Alpha je u tome što je BL21 genetski modifikovana kompetentna ćelija E. coli sa nedostatkom proteaze koja se koristi prvenstveno za ekspresiju proteina, dok je DH5 Alpha genetski modifikovana kompetentna ćelija E. coli sa mutacijom recA1 koja se prvenstveno koristi za transformaciju plazmida.
E. coli je jedan od poznatih organizama izbora za proizvodnju rekombinantnih proteina. To je postala najpopularnija platforma za izražavanje tokom godina. Takođe se koristi kao fabrika ćelija. BL21 i DH5 Alpha su dvije genetski modifikovane ćelije E. coli koje se trenutno koriste za ekspresiju proteina i transformaciju plazmida, respektivno.
Šta je BL21?
BL21 je genetski modificirana kompetentna ćelija E.coli s nedostatkom proteaze koja se prvenstveno koristi za ekspresiju proteina. E. coli BL21 je bakterijska ćelija izvedena iz B soja. Ima defekte Lon proteaze i ompT proteaze vanjske membrane. Obično se koristi za ekspresiju rekombinantnog proteina jer normalno donosi stabilnost eksprimiranim proteinima. BL21 je koristan za ekspresiju proteina sa pCold I-IV DNK i pCold TF DNK. Ali ova kompetentna ćelija E. coli nije namenjena za sistem ekspresije proteina koji koristi T7 promotor kao što je pET sistem. Razlog za to je što BL21 ne eksprimira T7 RNA polimerazu. Dodatno, nije preporučljivo koristiti za izgradnju ili pripremu plazmida jer nema recA mutaciju.
Slika 01: BL21
BL21 je prvi opisao Studier 1986. godine nakon raznih modifikacija B linije. BL21 ćelijama nedostaje LON proteaza, koja razgrađuje mnoge strane proteine. Nadalje, nedostaje još jedan gen koji kodira proteazu vanjske membrane (OmpT) čija je funkcija razgradnja ekstracelularnih proteina. Nedostatak ovih proteina pokreće uspješnu proizvodnju stranog proteina u ćelijama E. coli BL21. Nadalje, hsdSB mutacija u ovim stanicama sprječava metilaciju strane DNK i poremećaj u BL21 ćelijama.
Šta je DH5 Alpha?
DH5 Alpha je genetski modifikovana kompetentna ćelija E. coli sa recA1 mutacijom koja se prvenstveno koristi za transformaciju plazmida. DH5 Alpha E. coli ćelije su genetski modifikovane od strane američkog biologa Douglasa Hanahana kako bi se maksimizirala efikasnost transformacije. DH5 Alpha ćelija ima tri različite mutacije: recA1, endA1 i lacZΔM15. recA1 je mutacija u jednoj tački koja zamjenjuje glicin 160 sa i ostatkom asparaginske kiseline u recA polipeptidu. Ova mutacija onemogućava aktivnost rekombinaza i inaktivira homolognu rekombinaciju. endA1 mutacija inaktivira intracelularnu endonukleazu koja je sprečava da razgradi umetnuti plazmid.
Slika 02: DH5 Alpha
Štaviše, mutacija lacZΔM15 omogućava plavo-bijeli skrining transformiranih ćelija. Ove ćelije su kompetentne ćelije. Često se koriste sa transformacijom kalcijum hlorida za umetanje željenog plazmida. Nedavnim istraživanjem je utvrđeno da je DH5 Alpha ćelija sa Hanahan metodom najefikasnija ćelija kompetentna za transformaciju plazmida.
Koje su sličnosti između BL21 i DH5 Alpha?
- BL21 i DH5 Alpha su dvije genetski modifikovane E.coli
- Obje su kompetentne ćelije.
- Sastoje se od različitih mutacija.
- Oba nemaju prirodno stanište.
- Ovi se koriste u laboratorijske svrhe kao što su studije ekspresije i procedure kloniranja.
Koja je razlika između BL21 i DH5 Alpha?
BL21 je genetski modificirana kompetentna ćelija E. coli s nedostatkom proteaze koja se prvenstveno koristi za ekspresiju proteina. S druge strane, DH5 Alpha je genetski modifikovana kompetentna ćelija E. coli sa recA1 mutacijom koja se prvenstveno koristi za transformaciju plazmida. Dakle, ovo je ključna razlika između BL21 i DH5 Alpha. Nadalje, BL21 E. coli ćelija nema recA1 mutaciju, dok DH5 Alpha E. coli ćelija ima recA1 mutaciju.
Sljedeća infografika navodi razlike između BL21 i DH5 Alpha u obliku tabele.
Sažetak – BL21 vs DH5 Alpha
Nepatogene sojeve E. coli genetski su razvili naučnici za laboratorijske studije ekspresije i svrhe kloniranja. BL21 i DH5 Alpha su dvije genetski modifikovane ćelije E. coli. BL21 se prvenstveno koristi za studije ekspresije proteina. S druge strane, DH5 Alpha se prvenstveno koristi za potrebe transformacije plazmida. Dakle, ovo je sažetak razlike između BL21 i DH5 Alpha.
