Ključna razlika – Gram Stain vs Culture
Gram bojanje je tehnika bojenja koja se izvodi kako bi se bakterije razlikovale u dvije grupe prema debljini sloja peptidoglikana u njihovom ćelijskom zidu. Kultura je metoda uzgoja i održavanja mikroorganizama u laboratorijskim uslovima za različite analize. Ključna razlika između bojenja po gramu i kulture je njihova funkcija; gram soj tehnika bojenja bakterija gdje je kultura metoda uzgoja i održavanja mikroorganizama.
Šta je Gram Stain?
Bojenje po Gramu je važna tehnika diferencijalnog bojenja koja se koristi za identifikaciju bakterija u mikrobiologiji. Ovu tehniku je uveo danski bakteriolog Hans Christian Gram 1884. Bojenje po Gramu kategorizira bakterije u dvije velike grupe: gram pozitivne i gram negativne; oni su veoma važni u klasifikaciji i identifikaciji bakterija. Bojenje po Gramu se izvodi kao početni korak za karakterizaciju bakterija.
Bakterije su grupisane na osnovu razlika u njihovom ćelijskom zidu. Gram pozitivne bakterije sadrže debeli sloj peptidoglikana u svom ćelijskom zidu, dok Gram negativne bakterije sadrže tanak sloj peptidoglikana u svom ćelijskom zidu kao što je prikazano na slici 01. Ishod bojenja po gramu će se zasnivati na razlici u debljini sloja peptidoglikana u ćelijski zid.
Slika 1: Gram pozitivne i Gram negativne bakterije
Bojenje po Gramu se izvodi korišćenjem četiri različita reagensa i to; primarna mrlja, jedkalo, sredstvo za dekolorizaciju i protivbojno sredstvo. Kristalna ljubičica i safranin služe kao primarne i kontra mrlje, dok gram joda i 95% alkohola služe kao jedkasto sredstvo, odnosno dekolorizator.
Osnovni koraci bojenja po Gramu
- Bakterijski bris se priprema na čistom staklenom predmetu, fiksira se toplinom i ohladi.
- Razmaz je preplavljen kristalno ljubičastom bojom 1 – 2 minute.
- Razmaz se ispire sporo tekućom vodom iz slavine kako bi se uklonile suvišne mrlje.
- Gram joda se nanosi na bris 1 minut.
- Razmaz se ispere sporo tekućom vodom iz slavine
- Razmaz se pere sa 95% alkohola 2 – 5 sekundi i ispere sporo tekućom vodom iz slavine.
- Razmaz je obojen safraninom 1 minut
- Razmaz se ispere sporo tekućom vodom iz slavine, osuši i posmatra pod mikroskopom.
Na kraju bojenja po gramu, gram negativne bakterije će biti uočene u ružičastoj boji, dok će gram pozitivne bakterije biti u ljubičastoj boji kao što je prikazano na slici 02. Ishod bojenja po gramima je određen debljinom sloja peptidoglikana u njihovom ćelijskom zidu. Tokom koraka dekolorizacije, primarna mrlja i jedlica se lako uklanjaju sa gram negativnih bakterija i postaju bezbojne jer imaju tanak sloj peptidoglikana. Primarna mrlja se zadržava u gram pozitivnim bakterijama jer imaju debeli sloj peptidoglikana. Kontra bojenje neće biti efikasno za gram pozitivne bakterije zbog zadržavanja primarne mrlje. Tako će gram pozitivne bakterije biti vidljive u primarnoj boji mrlje, odnosno ljubičastoj boji. Kontra mrlja će obojati gram negativne bakterije i bit će vidljiva u boji koja je boja safranina. Stoga je lako kategorizirati bakterije u dvije grupe prema boji po Gramu i vrijedan je u diferencijaciji i identifikaciji bakterija.
Slika 2: Gram soj
Šta je kultura?
Mikrobna kultura je metoda uzgoja i održavanja mikroorganizama u laboratorijskim uvjetima za različite svrhe. Kulture se uzgajaju u čvrstim, polučvrstim i tečnim podlogama u zavisnosti od vrste i svrhe uzgoja mikroorganizama. Kulture su obezbeđene neophodnim hranljivim materijama i uslovima za rast koje su potrebni mikroorganizmima. Postoje različite komponente medijuma za kulturu kao što su izvor energije, izvor ugljenika, izvor azota, minerali, mikronutrijenti, voda, sredstvo za učvršćivanje, itd. Optimalna temperatura, kiseonik i pH treba da se podese prema vrsti mikroorganizma koji se uzgaja.
Postoje različite vrste mikrobnih kultura; na primjer, šaržna kultura, kontinuirana kultura, kultura uboda, kultura agar ploče, bujonska kultura, itd. Prema sastavu podloge za uzgoj, postoje različite vrste podloga za uzgoj poznate kao sintetička podloga, polusintetička podloga i prirodna podloga. Mikrobne kulture se pripremaju u sterilnim uslovima unutar posebne komore koja se zove laminarni protok vazduha. Podloga za uzgoj i staklena posuda se steriliziraju prije inokulacije željenog mikroorganizma. U odgovarajućim sterilnim uslovima, ciljni mikroorganizam se prenosi u sterilizovani hranljivi medij i inkubira na optimalnoj temperaturi. Unutar medijuma, mikroorganizam će rasti i razmnožavati se koristeći obezbeđene hranljive materije.
Slika 3: Bakterijska kultura na ploči
Koja je razlika između mrlje po Gramu i kulture?
Gram Stain vs Culture |
|
| Gramov soj je tehnika diferencijalnog bojenja koja se koristi za diferencijaciju i identifikaciju bakterija. | Mikrobna kultura je metoda uzgoja mikroorganizama u laboratoriji. |
| Komponente | |
| Ovo koristi različite reagense uključujući dvije mrlje. | Ovo koristi različite podloge za uzgoj kao što su čvrste, polučvrste i tečne podloge sastavljene od hranljivih materija i drugih neophodnih uslova. |
| Osnovne funkcije | |
| Ovo omogućava grupisanje bakterija u dvije grupe: gram negativne i gram pozitivne. | Ovo omogućava umnožavanje mikroorganizama za različite svrhe. |
| Baza | |
| Ishod bojenja po Gramu je zasnovan na razlikama u peptidoglikanskom sloju ćelijskog zida. | Mikroorganizmi će rasti i razmnožavati se unutar medija za kulturu. |
| Ishod | |
| Gram negativne bakterije su vidljive u ružičastoj boji, a gram pozitivne bakterije su vidljive u ljubičastoj boji. | Na pločama se mogu vidjeti kolonije mikroorganizama. Na tečnim medijima, mikroorganizmi su u suspendiranom obliku. |
Sažetak – mrlja po Gramu vs kultura
Mikrobne kulture se pripremaju i održavaju u laboratorijskim uslovima za različite svrhe kao što su skladištenje, testiranje, hemijsko prečišćavanje, itd. Bojenje po Gramu je postupak bojenja koji razlikuje bakterije u dve glavne grupe koje se nazivaju gram negativne i gram pozitivne bakterije. Stoga je razlika između bojenja po gramu i kulture u tome što je bojenje po gramu tehnika bojenja bakterija dok je kultura metoda uzgoja i održavanja mikroorganizama u laboratorijama.
