Ključna razlika između GFP-a i EGFP-a je u tome što je GFP protein divljeg tipa ugrađen u molekularno kloniranje ćelija nesisara, dok je EGFP poboljšana ili konstruirana vrsta GFP-a koji se može koristiti na stanicama sisara.
Molekularno kloniranje je napredna tehnika koju naučnici izuzetno koriste u ekspresiji proteina putem rekombinantne tehnologije. U tehnologiji rekombinantne DNK potrebno je uspješno transformirati rekombinantni vektor u organizam domaćina. Dakle, tokom procesa transformacije treba identifikovati i potvrditi da li je gen od interesa transformisan ili ne u domaćina. Da bi to procijenili, molekularni biolozi usvajaju nekoliko tehnika. Od tih tehnika, jedna je reporterski gen. Ovi reporterski geni djeluju kao selektivni markeri za odabir ispravnih transformanata. Dakle, zeleni fluorescentni protein (GFP) i poboljšani zeleni fluorescentni protein (EGFP) su dva reporterska proteina koja se koriste u molekularnom kloniranju.
Šta je GFP?
GFP je protein divljeg tipa koji sadrži 238 aminokiselinskih ostataka i nekoliko selektabilnih regija aminokiselinskih sekvenci koje ga razlikuju od ostalih fluorescentnih proteina. Nadalje, ovaj divlji tip proteina izvorno je bio izoliran od Aequorea Victoria; vrsta meduza. Međutim, u prirodnim pojavama, meduza je mogla proizvesti fluorescenciju zelene boje kao odgovor na određene podražaje.
Ranije je ovaj koncept iznenadio naučnike, pa su odlučili da ga koriste na svojim tehnologijama rekombinantne DNK. Shodno tome, naučnici su koristili ovaj mutantni oblik gena divljeg tipa kao reporterski gen u svojim studijama ekspresije gena. GFP gen divljeg tipa je sposoban da proizvodi protein koji daje fluorescenciju na sobnoj temperaturi ili pod UV svjetlom. Stoga, kada se umetne u transformante, izražava i proizvodi fluorescenciju. Ako fluorescencija nastaje nakon procesa transformacije, to potvrđuje uspjeh procesa transformacije. Jednostavnim riječima, fluorescentna emisija signalizira uspješnu transformaciju vektora koji nosi gen od interesa u domaćina.
Slika 01: GFP
Iz tog razloga, GFP djeluje kao in vivo marker genske ekspresije. Trenutno se za proizvodnju GFP-a koriste tehnike genetskog inženjeringa. Također, dostupne su mnoge poboljšane verzije GFP-a kao što je EGFP. Dakle, ovo omogućava efikasnu upotrebu GFP-a u studijama molekularnog kloniranja i ekspresije gena.
Šta je EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein ili EGFP je poboljšana verzija GFP-a. Jednostavnim rečima, možemo definisati EGFP kao projektovanu verziju divljeg tipa GFP. Kada gen divljeg tipa GFP mutira, proizvodi korisne efekte. Dakle, mutirani gen GFP omogućava ekspresiju novih karaktera, a kao rezultat toga možemo proizvesti Enhanced GFP sa poboljšanim karakteristikama. Nadalje, možemo uspješno uvesti mutacije u divlji tip GFP gena korištenjem zračenja ili kemijskih metoda. Ovi mutirani geni zatim proizvode EGFP, koji ima korisnije karakteristike.
Slika 02: EGFP
Poboljšane karakteristike EGFP-a su sljedeće;
- Mogu da emituje jače fluorescentne signale.
- Ima visoku osjetljivost.
- Može se koristiti na stanicama sisara umjesto prokariota i drugih eukariota nižeg nivoa.
- Takođe, obezbeđuje povećanu čistoću proizvoda.
Stoga, u poređenju sa GFP, EGFP je preferirani izbor za studije genske ekspresije. Međutim, proizvod je skuplji u odnosu na GFP.
Koje su sličnosti između GFP-a i EGFP-a?
- GFP i EGFP su dva proteina koji imaju sposobnost da emituju zelenu boju
- Stoga, oba funkcionišu kao reporterski proteini u studijama ekspresije gena.
- Takođe, moguće je sintetizirati oba koristeći tehnologiju rekombinantne DNK.
- Štaviše, lako je dodatno mutirati ova dva tipa kako bi se sintetizovale poboljšane forme.
Koja je razlika između GFP-a i EGFP-a?
Reporterski gen je gen koji se veže za gen od interesa u tehnologiji rekombinantne DNK. To signalizira uspješnu transformaciju rekombinantnog vektora domaćinu. Ovdje su GFP i EGFP dvije vrste zelenih fluorescentnih proteina koji rade kao reporterski proteini. Međutim, ključna razlika između GFP-a i EGFP-a je u tome što je GFP divlji tip dok je EGFP dizajnirana verzija GFP-a. Štaviše, EGFP ima više korisnih karakteristika od GFP. Na primjer, EGFP proizvodi jače fluorescentno svjetlo i osjetljiviji je od GFP-a. Druga razlika između GFP-a i EGFP-a su sistemi u kojima ih možemo koristiti. Sistemi koji nisu sisari koriste GFP dok sistemi sisara koriste EGFP.
Infografika ispod predstavlja razliku između GFP-a i EGFP-a u obliku tabele.
Sažetak – GFP vs EGFP
GFP i EGFP su reporterski proteini u studijama molekularnog kloniranja i ekspresije gena. GFP je protein divljeg tipa, koji je zeleni fluorescentni protein. Protein je u početku bio izolovan od meduze Aequorea victoria. Nasuprot tome, EFGP je poboljšani oblik GFP proteina. To je mutant divljeg tipa sa poboljšanim karakteristikama. Dakle, EFGP ima veću jačinu signala i veću osjetljivost. Stoga ga možemo koristiti na vektorima sisara. Nasuprot tome, GFP se uglavnom koristi samo na vektorima koji nisu sisari. Sve u svemu, ovo je razlika između GFP-a i EGFP-a.
