Ključna razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog eseja je u tome što kolorimetrijski test određuje koncentraciju obojenih jedinjenja u rastvoru, dok fluorometrijski test određuje kinetički mehanizam rastvora.
Biohemijski test je tehnika koja analitički detektuje ili kvantificira aktivnost biološke molekule ili supstance. To je in vitro proces. Kolorimetrijski test i fluorometrijski test su dve vrste uobičajenih biohemijskih testova koji se provode u laboratorijama. Višestruke tehnike kao što su ELISA i Western blotting su takođe složeni biohemijski testovi za kvantifikaciju metaboličke aktivnosti i merenje funkcionalnog ponašanja biomolekula kao što su proteini, enzimi i drugi mali molekuli. Ove vrste testova se koriste za identifikaciju interakcija protein-DNK, protein-RNA i protein-protein.
Šta je kolorimetrijska analiza?
Kolorimetrijski test je tehnika koja određuje koncentraciju obojenih spojeva u otopini. Drugim riječima, kolorimetrijski test je reakcija koja dovodi do promjene boje zbog enzimske ili kemijske reakcije između reagensa i analita. Kolorimetrijski testovi se praktikuju u biohemiji za testiranje enzima, specifičnih jedinjenja, hormona, antitela i drugih analita. Koriste kolorimetre ili spektrofotometre. Kolorimetri su instrumenti koji karakteriziraju obojene uzorke kako bi se pružila objektivna mjera karakteristika boje. Spektrofotometar je uređaj koji mjeri intenzitet svjetlosti kao funkciju boje ili talasne dužine svjetlosti.
Slika 01: Kolorimetrijski test
Kako kolorimetrijski test funkcionira?
U kolorimetrijskom testu, ploča se priprema sa određenim antitelom vezanim za jažice. Zatim se dodaje uzorak. Ovo može omogućiti da se uzorak veže za antitijelo. Zatim se detekciono antitelo i supstrat dodaju u jažice da reaguju sa sondom za detekciju. Stop rastvor se dodaje na kraju pre očitavanja. Prazan bunar koji se naziva blanko ostaje bez uzorka. U kolorimetrijskom testu, što je tamnija boja, veća je koncentracija analita. Obično je potrebna samo jedna talasna dužina za očitavanje. Ali ako postoji referentno mjerenje, koriste se dvije ili više talasnih dužina.
Šta je fluorometrijski test?
Fluorometrijski test je tehnika koja određuje kinetički mehanizam enzimskih reakcija. Fluorometrijski test se odvija formiranjem fluorescentnog proizvoda iz nefluorescentnog supstrata ili obrnuto. Ovaj test takođe koristi fluorescentni rezonantni prenos energije (FRET) gde enzimska reakcija menja položaj dva fluorofora u supstratu, čime se menja intenzitet fluorescencije.
Slika 02: Fluorometrijski test
Fluorometrijski testovi su generalno mnogo osetljiviji od drugih testova. Dijagnostičke procjene enzima u uzorcima tkiva, ćelija ili tekućine pacijenata povećavaju se zbog njihove veće osjetljivosti.
Kako radi fluorometrijski test?
U fluorometrijskom testu, supstrat se dodaje uzorku u ploči, a odgovor fluorescencije se uzima pomoću čitača ploča. Ovdje se svaka ćelija mjeri zasebno. Neprozirne ploče se koriste u fluorometrijskim testovima. Ovo smanjuje rasipanje svjetlosti. Za ovu vrstu analize potrebne su dvije talasne dužine. Jedna talasna dužina služi za detekciju ekscitacije, a druga talasna dužina je za emisiju.
Koje su sličnosti između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa?
- Kolorimetrijski test i fluorometrijski test su dvije vrste biohemijskih testova.
- Oba testa se rade radi medicinske dijagnostike.
- Ovi testovi uključuju enzimsku reakciju.
- Oba testa uključuju supstrat i analite.
Koja je razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa?
Kolorimetrijski test je tehnika koja određuje koncentraciju obojenih jedinjenja u rastvoru, dok je fluorometrijski test tehnika koja određuje kinetički mehanizam enzimskih reakcija. Dakle, ovo je ključna razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa. Štaviše, fluorometrijski testovi su osetljiviji od kolorimetrijskih testova; tako, fluorometrijski testovi imaju sposobnost detekcije više analita. Dakle, ovo je još jedna važna razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa. Nadalje, fluorometrijski testovi zahtijevaju dvije talasne dužine, dok se kolorimetrijski testovi izvode s jednom talasnom dužinom.
Infografika ispod prikazuje više razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa.
Sažetak – kolorimetrijski vs fluorometrijski test
Biohemijski test je analitički proces koji se koristi za određivanje i kvantifikaciju ćelijskih metaboličkih reakcija. Kolorimetrijski test i fluorometrijski test su dve vrste biohemijskih testova. Kolorimetrijski test je reakcija koja dovodi do promjene boje zbog enzimske ili kemijske reakcije između reagensa i analita, dok je fluorometrijska metoda tehnika koja se koristi za određivanje kinetičkog mehanizma enzimskih reakcija. Oba testa zavise od enzimske reakcije koja uključuje supstrat i analit. Fluorometrijski testovi su osetljiviji od kolorimetrijskih testova. Ono što je najvažnije, fluorometrijski testovi zahtevaju dve talasne dužine, dok se kolorimetrijski testovi mogu izvesti samo sa jednom talasnom dužinom. Dakle, ovo rezimira razliku između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa.
