Ključna razlika između kvasca jedan hibrid i kvasca dva hibrida je ta što je kvasac jedan hibrid in vitro test za analizu interakcija DNK-proteina, dok je hibrid kvasca dva in vitro test za analizu interakcija proteina i proteina.
Proučavanje interakcija između ćelijskih molekula može pomoći da se definiraju mjesta prepoznavanja uključena u ekspresiju gena i proteinske puteve. Interakcije DNK i proteina su sastavni dio ćelijskih procesa kao što su modifikacije DNK i regulacija transkripcije, itd. S druge strane, interakcije proteina i proteina igraju vitalnu ulogu u ćelijskim procesima kao što su replikacija, transkripcija, translacija i transdukcija signala. Stoga je kritično važno identificirati ove interakcije ćelijskih molekula kroz različite testove. Kvasac jedan hibrid i kvasac dva hibrid su dva in vitro testa zasnovana na analizi interakcija DNK-protein i protein-protein.
Šta je Yeast One Hybrid?
Yeast one hybrid (Y1H) je in vitro test za analizu intracelularnih interakcija DNK-proteina. Ovu metodu su prvi uspostavili Wang i Reed 1993. godine. Od tada je pokazala veću moć u biološkim istraživanjima. U ovom testu postoje dvije glavne komponente: DNK mamac i proteinski plijen.
Slika 01: Yeast One Hybrid
U proceduri, DNK sekvenca (DNK mamac) se prvo klonira uzvodno od dva različita reportera (HIS3, LacZ). Ovi reporterski konstrukti su integrisani u genom soja kvasca. Transkripcijski faktori se uzimaju kao proteinski plijen. Transkripcijski faktori su spojeni sa domenom transkripcione aktivacije (AD) kvasca Gal4 transkripcionog faktora kako bi se napravili hibridni proteini. Cijeli ovaj hibridni protein je integriran u plazmid prije nego što se uvede u soj kvasca. Nakon uvođenja rekombinantnog plazmida, kada transkripcijski faktor stupi u interakciju sa DNK fragmentom, AD dio aktivira ekspresiju reporterskog gena (HIS3 ili LacZ). Sekvenciranje plazmida omogućava identifikaciju faktora transkripcije koji se može vezati za fragment DNK. Nedavno je kvasac jedna hibridna metoda korištena za istraživanje dijagnoze bolesti. Stoga će se u budućnosti ovaj test više koristiti u naučnim istraživanjima i medicinskim tretmanima.
Šta je Hybrid kvasca?
Yeast two hybrid (Y2H) je in vitro test za analizu intracelularnih proteinskih i proteinskih interakcija. Ovu metodu su prvobitno pronašli Stanley Fields i Ok-Kyu Song 1989. godine. Ova tehnika otkriva interakcije proteina i proteina koristeći faktor transkripcije Gal4 kvasca.
Slika 02: Kvasac dva hibrida
U ovoj metodi, dvije fuzije (hibridi) se prvo konstruiraju korištenjem proteina od interesa: spajanjem jednog proteina sa DNK vezujućim domenom (DBD) i spajanjem drugog proteina sa domenom aktivatora (AD) faktora transkripcije Gal4. Protein spojen sa DBD poznat je kao mamac, dok je protein spojen sa AD poznat kao plijen. U soju kvasca, nakon interakcije mamca i plijena, DBD i AD se dovode u neposrednu blizinu kako bi se stvorio funkcionalni Gal4 transkripcijski faktor uzvodno od reporterskog gena. Funkcionalni faktor transkripcije aktivira ekspresiju reporterskog gena. Nadalje, ova metoda se trenutno koristi za skrining interakcija integralnih membranskih proteina u stanicama sisara.
Koje su sličnosti između kvasca jedan hibrid i kvasca dva hibrida?
- Kvasac jedan hibrid i kvasac dva hibrida su dva in vitro testa za analizu interakcija DNK-protein i protein-protein.
- Ovi testovi koriste sojeve kvasca.
- Oba testa koriste domen aktivacije (AD) faktora transkripcije Gal4.
- Koriste ekspresiju reporterskog gena (HIS3, ili LacZ) za otkrivanje interakcija.
- Imaju mamac i plijen.
- Oba testa su veoma korisna u modernim biološkim istraživanjima.
Koja je razlika između kvasca jedan hibrid i kvasca dva hibrida?
Hybrid kvasca jedan je in vitro test za analizu interakcija DNK i proteina, dok je hibrid kvasca dva in vitro test za analizu interakcija proteina i proteina. Dakle, ovo je ključna razlika između kvasca jedan hibrid i kvasca dva hibrida. Nadalje, kod jednog hibrida kvasca mamac je fragment DNK, a plijen je proteinski molekul. S druge strane, u dva hibrida kvasca, i mamac i plijen su proteinski molekuli.
Infografika ispod navodi razlike između hibrida kvasca jedan i hibrida kvasca dva u obliku tabele za usporedbu.
Sažetak – Kvasac jedan hibrid protiv kvasca dva hibrid
Kvasac jedan hibrid i kvasac dva hibrid su dva važna in vitro testa. Hibrid kvasca jedan je in vitro test za analizu interakcija DNK i proteina, dok je hibrid kvasca dva in vitro test za analizu interakcija proteina i proteina. Dakle, ovo je ključna razlika između kvasca jedan hibrid i kvasca dva hibrida.
